产品搜索
公司动态
宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒(磁珠法)实验操作细则
发表时间：2022-10-26
宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒(磁珠法)实验操作细则：
一、 样本处理：
1. 取 100ul 待检样本至 1.5ml 干净的离心管中，加入 10ul 5M NaCl 溶液，用涡旋 振 荡器充分震荡 10 秒；
2. 加入 10ul 蛋白酶 K，在涡旋振荡器上充分震荡 10 秒；
3. 配制新鲜的裂解液，其组成为： 130ul 裂解液/100ul 样本， 9ul 肝糖原/100 样本， 0.2ul tRNA/100ul 样本，充分混匀以制成新鲜配制的裂解液；
4. 将 139ul 新鲜配制的裂解液加入到样本管中， 然后用涡旋振荡器充分震荡 10 秒， 取出短 暂快速离心 5 秒，然后放置在 56oC 孵育 30 分钟；
二、 DNA 捕获：
1. 将磁珠充分涡旋振荡以完全重悬；
2. 将样本管从孵育器中取出， 进行简短的离心，将液体收集到管底，然后加入完全重悬的 磁珠 60ul 和 230ul 结合液，在涡旋振荡器上充分震荡 10 秒； (注意： 在加入磁珠时， 需经 常振荡重悬磁珠， 以保证吸取时磁珠的均匀性。建议每加 3-4 组样本后， 重悬磁珠后再进行 后续样本的添加)
3. 将震荡后的样本管，置于旋转混匀器或涡旋振荡器上 10 分钟以进行磁珠捕获；
4. 将样本管从旋转混匀器上取下，在 10000g 的条件下离心 1 分钟使磁珠充分聚集；
5. 将离心后的样本管置于磁力架上， 待溶液完全澄清后， 用枪头小心移去上清(注： 避免 枪头搅动磁珠，使得磁珠同上清一起被除去从而影响得率)；
三、 洗涤：
1. 样本管移去上清后，不必将样本管从磁力架上取下，直接加入 400ul 洗涤液；
2. 待溶液完全澄清后，磁珠完全分离，用枪头小心移去上清；
人钩端螺旋体IgM(Lebtospira)ELISA Kit
人钩端螺旋体IgG(Lep IgG)ELISA Kit
人阿米巴(Amebiasis)ELISA Kit
人白喉抗体(Diphtheria Ab)ELISA Kit
人囊虫病抗体(CYT Ab)ELISA Kit
人布鲁氏菌抗体IgG(Brucella Ab IgG)ELISA Kit
人水痘带状疱疹病毒IgM(VZV-IgM)ELISA Kit
人水痘带状疱疹病毒IgG(VZV-IgG)ELISA Kit
人军团菌抗体IgA(LP Ab-IgA)ELISA Kit
人军团菌抗体IgM(LP Ab-IgM )ELISA Kit
人军团菌抗体IgG(LP Ab-IgG)ELISA Kit
人腮腺炎病毒IgM ELISA Kit
人腮腺炎病毒IgG ELISA Kit
人EB病毒IgM(EBv IgM)ELISA Kit
人EB病毒IgA(EBv IgA)ELISA Kit
人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA Kit
人利什曼原虫抗体(Leishimaria Ab)ELISA Kit
人登革热抗体(DF-Ab)ELISA Kit
人流感病毒抗体IgG(FLU)ELISA Kit
人腺病毒IgM(ADV-IgM)ELISA Kit
人腺病毒IgG(ADV-IgG)ELISA Kit
人轮状病毒(RV)IgM ELISA Kit
人艾柯病毒IgM(ECHO IgM)ELISA Kit
人抗呼吸道合胞病毒抗体(RSV)ELISA Kit
人麻疹病毒IgM(MV IgM)ELISA Kit
人柯萨奇病毒IgM(Cox V-IgM)ELISA Kit
3. 保持样本管在磁力架上， 加入 400ul 洗涤液， 待溶液澄清， 磁珠完全分离后， 用枪头小 心移去上清；
4. 将样本管从磁力架上取下， 于 10000g 的条件下离心 30 秒，使得残留的洗涤液完全聚集 到管底；
5. 将样本管置于磁力架上，待磁珠完全分离后，用 10ul 枪头小心移除残留的液体；
6. 将样本管从磁力架上取下，置于 70oC 金属浴中，放置 4 分钟， 除去残留的乙醇(注： 若干燥不够， 残留的乙醇会影响后续的定量检测反应)；待磁珠团出现裂纹时，将样本管从 金属浴中取出进行 DNA 洗脱；
四、 DNA 洗脱：
1. 沿着样本管的管壁加入 50- 100ul 洗脱液，用 100ul 的枪头反复吹吸，以完全重悬磁珠；
2. 将样本管置于 70oC 孵育器孵育 10 分钟；
3. 将样本管从孵育器中取出，于 20000g 离心 2 分钟，然后至于磁力架上，待磁珠完全分 离后，用 10ul 枪头小心将上清液体转移至新的干净的离心管中；
4. 为了避免吸入磁珠，在离心管中还剩余少量液体时，将其于 20000g 离心 2 分钟，然后 至于磁力架上以吸出剩余的液体。
一、 样本处理：
1. 取 100ul 待检样本至 1.5ml 干净的离心管中，加入 10ul 5M NaCl 溶液，用涡旋 振 荡器充分震荡 10 秒；
2. 加入 10ul 蛋白酶 K，在涡旋振荡器上充分震荡 10 秒；
3. 配制新鲜的裂解液，其组成为： 130ul 裂解液/100ul 样本， 9ul 肝糖原/100 样本， 0.2ul tRNA/100ul 样本，充分混匀以制成新鲜配制的裂解液；
4. 将 139ul 新鲜配制的裂解液加入到样本管中， 然后用涡旋振荡器充分震荡 10 秒， 取出短 暂快速离心 5 秒，然后放置在 56oC 孵育 30 分钟；
二、 DNA 捕获：
1. 将磁珠充分涡旋振荡以完全重悬；
2. 将样本管从孵育器中取出， 进行简短的离心，将液体收集到管底，然后加入完全重悬的 磁珠 60ul 和 230ul 结合液，在涡旋振荡器上充分震荡 10 秒； (注意： 在加入磁珠时， 需经 常振荡重悬磁珠， 以保证吸取时磁珠的均匀性。建议每加 3-4 组样本后， 重悬磁珠后再进行 后续样本的添加)
3. 将震荡后的样本管，置于旋转混匀器或涡旋振荡器上 10 分钟以进行磁珠捕获；
4. 将样本管从旋转混匀器上取下，在 10000g 的条件下离心 1 分钟使磁珠充分聚集；
5. 将离心后的样本管置于磁力架上， 待溶液完全澄清后， 用枪头小心移去上清(注： 避免 枪头搅动磁珠，使得磁珠同上清一起被除去从而影响得率)；
三、 洗涤：
1. 样本管移去上清后，不必将样本管从磁力架上取下，直接加入 400ul 洗涤液；
2. 待溶液完全澄清后，磁珠完全分离，用枪头小心移去上清；
人钩端螺旋体IgM(Lebtospira)ELISA Kit
人钩端螺旋体IgG(Lep IgG)ELISA Kit
人阿米巴(Amebiasis)ELISA Kit
人白喉抗体(Diphtheria Ab)ELISA Kit
人囊虫病抗体(CYT Ab)ELISA Kit
人布鲁氏菌抗体IgG(Brucella Ab IgG)ELISA Kit
人水痘带状疱疹病毒IgM(VZV-IgM)ELISA Kit
人水痘带状疱疹病毒IgG(VZV-IgG)ELISA Kit
人军团菌抗体IgA(LP Ab-IgA)ELISA Kit
人军团菌抗体IgM(LP Ab-IgM )ELISA Kit
人军团菌抗体IgG(LP Ab-IgG)ELISA Kit
人腮腺炎病毒IgM ELISA Kit
人腮腺炎病毒IgG ELISA Kit
人EB病毒IgM(EBv IgM)ELISA Kit
人EB病毒IgA(EBv IgA)ELISA Kit
人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA Kit
人利什曼原虫抗体(Leishimaria Ab)ELISA Kit
人登革热抗体(DF-Ab)ELISA Kit
人流感病毒抗体IgG(FLU)ELISA Kit
人腺病毒IgM(ADV-IgM)ELISA Kit
人腺病毒IgG(ADV-IgG)ELISA Kit
人轮状病毒(RV)IgM ELISA Kit
人艾柯病毒IgM(ECHO IgM)ELISA Kit
人抗呼吸道合胞病毒抗体(RSV)ELISA Kit
人麻疹病毒IgM(MV IgM)ELISA Kit
人柯萨奇病毒IgM(Cox V-IgM)ELISA Kit
3. 保持样本管在磁力架上， 加入 400ul 洗涤液， 待溶液澄清， 磁珠完全分离后， 用枪头小 心移去上清；
4. 将样本管从磁力架上取下， 于 10000g 的条件下离心 30 秒，使得残留的洗涤液完全聚集 到管底；
5. 将样本管置于磁力架上，待磁珠完全分离后，用 10ul 枪头小心移除残留的液体；
6. 将样本管从磁力架上取下，置于 70oC 金属浴中，放置 4 分钟， 除去残留的乙醇(注： 若干燥不够， 残留的乙醇会影响后续的定量检测反应)；待磁珠团出现裂纹时，将样本管从 金属浴中取出进行 DNA 洗脱；
四、 DNA 洗脱：
1. 沿着样本管的管壁加入 50- 100ul 洗脱液，用 100ul 的枪头反复吹吸，以完全重悬磁珠；
2. 将样本管置于 70oC 孵育器孵育 10 分钟；
3. 将样本管从孵育器中取出，于 20000g 离心 2 分钟，然后至于磁力架上，待磁珠完全分 离后，用 10ul 枪头小心将上清液体转移至新的干净的离心管中；
4. 为了避免吸入磁珠，在离心管中还剩余少量液体时，将其于 20000g 离心 2 分钟，然后 至于磁力架上以吸出剩余的液体。
