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牛免疫缺损病毒PCR检测试剂盒反应五要素

发表时间:2022-10-25
牛免疫缺损病毒PCR检测试剂盒反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:

①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。

②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

纤溶酶原激活剂抑制物(PAI-1)ELISA试剂盒
纤溶酶原激活剂(PLGA)ELISA试剂盒
纤溶酶原(Plg)ELISA试剂盒
纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)ELISA试剂盒
纤溶酶/纤维蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA试剂盒
纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒
细菌性阴道病(BV)ELISA试剂盒
细胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA试剂盒
细胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA试剂盒
细胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA试剂盒
细胞周期素A2(Cyclin-A2)ELISA试剂盒
细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)ELISA试剂盒
细胞周期蛋白A1(CCNA1)ELISA试剂盒
细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)ELISA试剂盒
细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS-1)ELISA试剂盒
细胞纤维连接蛋白(cFn)ELISA试剂盒
细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA试剂盒
细胞色素P450c21B/21-羟化酶(CYP21B)ELISA试剂盒
细胞色素P450c21A/21-羟化酶(CYP21A)ELISA试剂盒
细胞色素P450(CYP450)ELISA试剂盒


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