免疫荧光技术的实验步骤：

一、准备好试剂与仪器：

磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。

二、实验步骤

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，十分钟后弃去，使标本保持一定湿度。

2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间以三十分钟为参考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分钟，并不停地摇晃振荡。

4.取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
别 名 Cytosolic inhibitor of Nrf2; INrf 2; INrf2; Keap 1; KEAP1; KEAP1_HUMAN; Kelch like ECH associated protein 1; Kelch like protein 19; Kelch-like ECH-associated protein 1; Kelch-like protein 19; KIAA0132; KLHL 19; KLHL19; MGC10630; MGC1114; MGC20887; MGC4407; MGC9454.

纯化方法 affinity purified by Protein A

储 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500 

产品名称	胞质接头蛋白Keap10.1ml/100μg0.2ml/200μg
英文名称	Anti-KEAP1
货号	LZK65055

英文名称 Anti-KEAP1

中文名称 胞质接头蛋白Keap1

浓 度 1mg/1ml

规 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg

抗体来源 Rabbit

克隆类型 polyclonal

交叉反应 Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit

产品类型 一抗

研究领域 细胞生物 发育生物学 信号转导 细胞凋亡 转录调节因子 激酶和磷酸酶

蛋白分子量 predicted molecular weight: 69kDa

性 状 Lyophilized or Liquid

免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human KEAP1

亚 型 IgG

抗体的制备过程：

1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白，纯化鉴定后可直接作为免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原，常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫动物：常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等，大量 时需要用到狗、绵羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集：一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血，家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用采血，家兔、山羊、绵羊可采用采血。

4. 免疫血清的纯化与鉴定：得到的抗血清需要进一步的纯化，利用偶联了抗原的亲和柱进行层析，具有高效，特异性强，纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。

5. 免疫血清的保存：抗体一般比较稳定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价，而真空干燥保存时间可以更久。联祖保存前需经除菌并添加防腐剂。

 

 

抗体分子标记技术：

（一）原理

当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。

（二）准备

1.试剂

经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体；0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5；无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5）；胺T反应终止缓冲液；

2.仪器

凝胶过滤柱；￥-记数器；玻璃纤维滤。

（三）操作要点

1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行；

2.如果氧化反应损伤蛋白质，可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m，并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年；

4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天）；

5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。

枸橼他莫昔芬标准品纯度：≥95%Insulin (from porcine pancreas  1g

他布标准品纯度：≥98% Insulin protein (Active  100mg重组人细胞子

塔格糖标准品纯度：≥98% Insulin protein (from porcine pancreas  1g猪

他克莫司标准品纯度：≥98% Insulin Receptor- Beta(ISR- Beta  100mg  

盐他克林标准品纯度：0.97Insulin Receptor(ISR  10g  

舒芬标准品纯度：≥98% Insulin Receptor-Alpha(ISR-Alpha  1g  

琥珀舒马曲坦标准品纯度：≥98% Insulin Receptor-Alpha(ISR-Alpha  1mg  

舒马曲坦标准品纯度：≥98% Integrin a7(integrin alpha 7  5mg整合素α7抗原

舒利标准品纯度：97%Integrin alpha 1  整合素α1抗原 500GIntegrin alpha 1  整合素α1抗原

舒林相关物质A标准品纯度：97%Integrin Alpha 4/ITGA4(Integrin alpha 4  25G  

舒林标准品纯度：≥98%Integrin alpha E2 peptide  整合素alpha E2抗原 25mgIntegrin alpha E2 peptide  整合素alpha E2抗原

异噁标准品纯度：≥98% Integrin alpha V  巨噬细胞来源的趋子αV多肽 10mgIntegrin alpha V  巨噬细胞来源的趋子αV多肽

二甲异噁唑标准品纯度：≥98% Integrin alpha V/CD51 peptide  整合素αV抗原 5 x 10mgIntegrin alpha V/CD51 peptide  整合素αV抗原

保泰松标准品纯度：≥98% Integrin Alpha3  整合素α3抗原 5 x 5mgIntegrin Alpha3  整合素α3抗原

噻唑标准品纯度：≥98% Integrin Alpha4 Beta7/LPAM-1 (Lymphocyte Peyer’s patch Adhesion Molecule 1/Integrin alpha4,beta7  25mg整合素α4β7抗原
CD200分子(CD200)抗体  英文名称：CD200 ELISA Kit，CD200，

Bcl2关联X蛋白(Bax)抗体  英文名称：Bax ELISA Kit，Bax，

AMP激活蛋白激酶α1(PRKAα1)抗体  英文名称：PRKAα1 ELISA Kit，PRKAα1，

促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)抗体  英文名称：TPPP ELISA Kit，TPPP，

补体受体4(CR4)抗体  英文名称：CR4 ELISA Kit，CR4，

成簇蛋白(TUFT)抗体  英文名称：TUFT ELISA Kit，TUFT，

表面活性物质关联蛋白B(SPB)抗体  英文名称：SPB ELISA Kit，SPB，

半乳糖凝集素9B(GAL9B)抗体  英文名称：GAL9B ELISA Kit，GAL9B，

白细胞关联免疫球蛋白样受体2(LAIR2)抗体  英文名称：LAIR2 ELISA Kit，LAIR2，

白介素1受体关联激酶3(IRAK3)抗体  英文名称：IRAK3 ELISA Kit，IRAK3，

氨甲基转移酶(AMT)抗体  英文名称：AMT ELISA Kit，AMT，

胞质接头蛋白Keap10.1ml/100μg0.2ml/200μgβ-骨胶原交联(βCTx)抗体  英文名称：βCTx ELISA Kit，βCTx，

V-Yes-1Yamaguchi病毒相关癌基同源物(LYN)抗体  英文名称：LYN ELISA Kit，LYN，

Tomoregulin1蛋白(TR1)抗体  英文名称：TR1 ELISA Kit，TR1，

胱天蛋白酶12(CASP12)抗体  英文名称：CASP12 ELISA Kit，CASP12，

高迁移率族蛋白1(HMG1)抗体  英文名称：HMG1 ELISA Kit，HMG1，

谷胱甘肽S转移酶ω1(GSTω1)抗体  英文名称：GSTω1 ELISA Kit，GSTω1，