免疫荧光技术的实验步骤：

一、准备好试剂与仪器：

磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。

二、实验步骤

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，十分钟后弃去，使标本保持一定湿度。

2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间以三十分钟为参考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分钟，并不停地摇晃振荡。

4.取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
别 名 PTPRCAP: LPAP: LyPAP: Mature chain: Variant: Lymphocyte Phosphatase-Associated Phosphoprotein; PTCA_HUMAN.

纯化方法 affinity purified by Protein A

储 存 液 Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500 

产品名称	淋巴细胞磷蛋白磷酸酶相关蛋白抗体0.1ml/100μg0.2ml/200μg
英文名称	Anti-LPAP
货号	LZK65004

英文名称 Anti-LPAP

中文名称 淋巴细胞磷蛋白磷酸酶相关蛋白抗体

浓 度 1mg/1ml

规 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg

抗体来源 Rabbit

克隆类型 polyclonal

交叉反应 Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Sheep

产品类型 一抗

研究领域 细胞生物 激酶和磷酸酶 淋巴细胞 细胞自噬

蛋白分子量 predicted molecular weight: 23kDa

性 状 Lyophilized or Liquid

免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human LPAP

亚 型 IgG

抗体的制备过程：

1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白，纯化鉴定后可直接作为免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原，常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫动物：常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等，大量 时需要用到狗、绵羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集：一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血，家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用采血，家兔、山羊、绵羊可采用采血。

4. 免疫血清的纯化与鉴定：得到的抗血清需要进一步的纯化，利用偶联了抗原的亲和柱进行层析，具有高效，特异性强，纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。

5. 免疫血清的保存：抗体一般比较稳定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价，而真空干燥保存时间可以更久。联祖保存前需经除菌并添加防腐剂。

 

 

抗体分子标记技术：

（一）原理

当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。

（二）准备

1.试剂

经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体；0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5；无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5）；胺T反应终止缓冲液；

2.仪器

凝胶过滤柱；￥-记数器；玻璃纤维滤。

（三）操作要点

1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行；

2.如果氧化反应损伤蛋白质，可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m，并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年；

4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天）；

5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。

10-脱巴卡丁III纯度：≥99% 14-3-3 family protein(Malus domestica (Apple  1g植物14-3-3蛋白抗原

10-基喜树碱纯度：≥97% 14-3-3 protein  14-3-3 蛋白（多肽抗原  25mg

11-氧-罗汉果皂甙V纯度：≥98%2,4-D/BSA  2，4-二氧乙偶联牛血清白蛋白 5mg2,4-D/BSA  2，4-二氧乙偶联牛血清白蛋白

13-基-9-羟基巴卡丁III纯度：≥98% 2,4-D/KLH(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid  500mg2，4-二氧乙偶联血蓝蛋白

18B-甘草次纯度：97%5-HT(5-Hydroxy-L-tryptophan/L-5-HTP  100mg5-羟色

1-脱氧野尻霉素纯度：≥95% 5-HTR1A (5-HT1A (5-hydroxytryptamine/serotonin receptor 1A; 5HT1a; ADRBRL1; ADRB2RL1; HTR1A  25mg  

1－乙基－5－去基－巴卡亭I 纯度：≥98%5-HTR2A  5-羟色受体2A抗原 100mg5-HTR2A  5-羟色受体2A抗原

20(22)--原人参二醇纯度：≥97%5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin  1g 5-羟色受体3抗原

20(S)-人参皂苷C-K纯度：≥98% 5-HTR4(5 hydroxytryptamine serotonin receptor 4  6 x 10mg5-羟色受体4抗原

20(S)-原人参二醇皂苷纯度：≥98% 5-LOX (5-lipoxygenase  6 x 5mg5-脂氧合酶抗原

23-羟基白桦 纯度：≥98% A Beta1-40 (H-3-me6;H-3-me13;H-3-me14; Beta-Amyloid 1-40  250mg  

25-羟基-原人参二醇 纯度：≥97%A Beta1-40 (mutation type, MT  9 x 10mg  peptide  突变型β淀粉样肽1-40

25-羟基-原人参三醇 纯度：≥97%A Beta29-40( Beta-Amyloid 29-40  50mg  

2-O-没食子酰基金丝桃苷 纯度：≥98% A Beta29-42( Beta-Amyloid 29-42  10mg  

2-羟基泽兰内酯纯度：≥97% A/H1N1-M2 Human(Avian influenza Matrix Protein-2 Human  5 x 10mgA型人病毒H1N1-M2蛋白多肽
蛋白酪氨酶受体H(PTPRH)抗体  英文名称：PTPRH ELISA Kit，PTPRH，

弹性蛋白微原纤维界面子1(EMILIN1)抗体  英文名称：EMILIN1 ELISA Kit，EMILIN1，

丛状蛋白B3(PLXNB3)抗体  英文名称：PLXNB3 ELISA Kit，PLXNB3，

沉默调节蛋白1(SIRT1)抗体  英文名称：SIRT1 ELISA Kit，SIRT1，

补体成分*(C*)抗体  英文名称：C* ELISA Kit，C*，

淋巴细胞磷蛋白磷酸酶相关蛋白抗体0.1ml/100μg0.2ml/200μg吡哆激酶(PDXK)抗体  英文名称：PDXK ELISA Kit，PDXK，

基质金属蛋白酶17(MMP17)抗体  英文名称：MMP17 ELISA Kit，MMP17，

肌间蛋白3(MYOM3)抗体  英文名称：MYOM3 ELISA Kit，MYOM3，

肌球蛋白重链2(MYH2)抗体  英文名称：MYH2 ELISA Kit，MYH2，

滑行蛋白α(TXLNα)抗体  英文名称：TXLNα ELISA Kit，TXLNα，

核子κB(NFκB)抗体  英文名称：NFκB ELISA Kit，NFκB，

核仁蛋白6(NOL6)抗体  英文名称：NOL6 ELISA Kit，NOL6，

含RCC1和BTB域蛋白2(RCBTB2)抗体  英文名称：RCBTB2 ELISA Kit，RCBTB2，

冠蛋白2A(CORO2A)抗体  英文名称：CORO2A ELISA Kit，CORO2A，

谷胱甘肽S转移酶α4(GSTα4)抗体  英文名称：GSTα4 ELISA Kit，GSTα4，

高尔基体蛋白A6(GOLGA6)抗体  英文名称：GOLGA6 ELISA Kit，GOLGA6，

肝素结合性表皮生长子(HBEGF)抗体  英文名称：HBEGF ELISA Kit，HBEGF，