实验内容：
1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 
2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 
3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 
4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌
资源名称 绿木霉说明书

种属: Trichoderma virens

形态: 在Czapek's 琼脂上产绿色孢子，在综合PDA上形成一层白色菌丝。

提供形式: 冻干粉

安全等级: 1

模式菌株: no

应用领域: 降解塑料、测试   降解塑料、测试

培养基: Czapek's 琼脂：蔗糖 30.0 g,NaNO3 3.0 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,KCl 0.5 g,FeSO4·4H2O 0.01 g,K2HPO4 1.0 g,琼脂 15.0 g,蒸馏水 1.0 L,pH 6.0-6.5， 115℃，20min。

生长条件: 25℃，典型好氧
保存方法：
传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙 。
液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
悬液保存法：
① 蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。
② 糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。
载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。

微生物菌种的培养：
⒈ 孢子制备
⑴ 放线菌孢子的制备
一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1％，氮源不超过0.5％)，碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境，不利于放线菌孢子的形成，氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下，干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃，少数为37 ℃，培养时间为5～14天。
⑵ 霉菌孢子的制备
霉菌的孢子培养，一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖，而且这类培养基的表面积较大，可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25～28 ℃，培养时间为4～14天。
⒉ 种子制备
⑴ 摇瓶种子制备
摇瓶种子进罐，常采用母瓶、子瓶两级培养，有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全，并易被菌体分解利用，氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓，子瓶培养基浓度比母瓶略高，更接近种子罐的培养基配方。
⑵ 种子罐种子制备
种子罐种子制备的工艺过程，因菌种不同而异，一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中，经培养后形成大量的菌丝，这样的种子称为一级种子，把一级种子转入发酵罐内发酵，称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内，经过培养形成更多的菌丝，这样制备的种子称为二级种子，将二级种子转入发酵罐内发酵，称为三级发酵。同样道理，使用三级种子的发酵，称为四级发酵。

三羟甲基氨基甲烷 KLH conjugated synthetic peptide derived from human SFRP1 C-terminus WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500 Anti-SFRP1

硫酸胺 KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human SATB1 around the phosphorylation site of Ser47 WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500 Anti-Phospho-SATB1(Ser47)

pF25A ICE T7 Flexi(R)载体 KLH conjugated synthesised phosphopeptide derived from human TSFP1 around the phosphorylation site of Thr453 WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500 Anti-phospho-TSFP1/SP1(Thr453)

单次使用HB101感受态细胞 KLH conjugated synthesised phosphopeptide derived from human ARP2 around the phosphorylation site of Thr237 WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500 Anti-phospho-ARP2(Thr237)

氯化钾 KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human Ezrin around the phosphorylation site of Tyr146 WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500 Anti-Phospho-Ezrin(Tyr146)

pCMVTNT(TM)载体系统 KLH conjugated synthetic peptide derived from human TSHB WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500 Anti-TSHB(2T11)

pNL1.2[NlucP]载体系统 KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human TERT around the phosphorylation site of Ser1125 WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500 Anti-phospho-TERT(Ser1125)

pNL1.3[secNluc]载体系统 KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human TRIM25 around the phosphorylation site of Ser100 WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500 Anti-phospho-TRIM25(Ser100)

pNL3.1[Nluc/minP]载体系统 KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human TRAP220 around the phosphorylation site of Thr1457 WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500 Anti-phospho-TRAP220/MED1(Thr1457)

pNL3.2.NF-kB-RE [NlucP/NF-kB-RE/Hygro]载体系统 KLH conjugated Synthesised acetylpeptide derived from human TIRAP around the acetylation site of Tyr86 [KD(p-Y)DV] WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500 Anti-phospho-TIRAP(Tyr86)
绿木霉说明书人肺巨细胞癌高转移细胞株；PG-BE1 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

人肺巨细胞癌低转移细胞株；PG-LH7 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

人乳腺导管癌细胞；HCC38 培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；4.5g/L Glucose＋1mM钠

人髓母细胞瘤细胞；Daoy 培养条件  DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS