传代方法：

产品仅用于科研收到细胞后，取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。。

（二）如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来。

3. 加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中。一传二。

注意：传代后一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。

细胞名称 小鼠细胞；EL4.IL-2

形态特性: 淋巴母细胞

生长特性: 悬浮生长

特征特性: 这是EL4(ATCCTIB-39)的一个能对12-十四烷酸-13-醋酸佛波醇(PMA)反应生成IL-2的亚株。在含PMA的培养基中24小时后生成的IL-2浓度达2500U/ml。检测表明肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。

培养条件: RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清，10%

传代方法: 1:2。3天内可长满。

传代情况: PN5

冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS

注意事项：

1.接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。

2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。

3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。

5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。

6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。

7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）产品仅用于科研观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

5-氟-1,3-二甲基尿嘧啶5-Fluoro-1,3-dimethyluracil质量规格：美国进口

5-氟-2‘-脱氧尿苷;氟尿苷5-Fluoro-2'--deoxyuridine质量规格：>99%,BR

5-氟胞苷(>98%,BR)5-Fluorocytidine质量规格：>98%,BR

5-氟二氢嘧啶-2,4-二酮5-Fluorodihydropyrimidine-2,4-dione质量规格：美国进口

5-氟尿嘧啶核苷5-Fluorouridine质量规格：美国进口

5-氟乳清酸；5-FOA5-Fluoroorotic703-95-7

5-氟乳清酸水合物5-Fluoroorotichydrate

5-氟脱氧胞苷5-Fluoro-2'-deoxycytidine质量规格：98%,进分

5-氟吲哚-2-羧酸5-Fluoroindole-2-carboxylic399-76-8

5-磺基水杨酸sulfosalicyclic5965-83-3

5-甲基-1,10-菲咯啉水合物(>98.0%(T))5-Methyl-1,10-phenanthroline3002-78-6

5-甲基胞嘧啶5-methylcytosine质量规格：>98%,BR

5-甲基尿苷5-Methyluridine质量规格：>99%,BR

5-甲基四氢叶酸5-MTHF；5-MethyltetrahydrofolicCalcium

5-甲基烟酸5-Methylnicotinic3222-49-9
小鼠细胞；EL4.IL-2说明书Ficol70　聚蔗糖70　质量规格：>98%,标准品

Guanidinecarbonate　碳酸胍(>98%,BR)　质量规格：>98%,标准品

Hydrazinehydrochloride　盐酸肼(>98%,BR)　质量规格：>98%,标准品

Iron(III)sulfate,hydrate　水合硫酸铁(>99%,BR)　质量规格：>98%,标准品

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PhosphodiesteraseIIfromBovineSpleen　磷酸二酯酶II　质量规格：>98%,标准品

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Cerium(III)carbonate,hydrate　碳酸铈　质量规格：>98%,标准品