血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及枸橼酸钠。
【友情提示】:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失,请仔细阅读购买说明!
产品名称
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规格
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检测方法
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货号
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H辅酶ⅡNADP测试剂盒微量法
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100管/48样
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微量法
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LZ-01349S
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商品介绍:
测定意义
辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+和NADPH含量测定可以计算NADP(NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
测定原理
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。NADPH通过PMS的递氢作用,使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒,570nm下检测吸光值,从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原NADP+为NADPH,从而检测NADP+含量。
所需的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
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实验通用规则:
1、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
2、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
3、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
4、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
5、实验时,要使底物避光保存。
6、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
7、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。
8、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
9、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时。
10、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。
SOST Others Rat 大鼠 SOST / Sclerostin 人细胞裂解液 (阳性对照) 依鲁替尼(PCI32765)质量规格:>98%,BTK抑制剂Ibrutinib,PCI-32765
人张氏肝细胞;Chang liver右旋兰索拉唑(标准品)质量规格:含量测定,标准品(R)-Lansoprazole
IL17RC Others Human 人 IL17RC (aa 1-454) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 右旋兰索拉唑质量规格:>99%,BR(R)-Lansoprazole
恒河猴肾细胞;RM-3乐伐替尼质量规格:>98%,VEGFR抑制剂Lenvatinib(E7080)
HuT78细胞,T细胞细胞 恶性色素瘤,A375细胞 EB病毒转化的人B细胞;HH-015-硝基吲哚(>98.0%(GC))质量规格:>98.0%(GC)5-Nitroindole
平滑肌细胞培养基SMCM-prf3,5-二扶/3,5-二扶嘧啶,英文名或英文缩写:3,5-Difluoropyridine,级别:CP,规格:500克
TOV-112D细胞,人上皮性细胞 人肾小管近段上皮细胞,HK-2细胞 子宫内膜上皮细胞Many types of
cells包装:5 × 105方(1ml)四甘醇 Tetraglycol
31692-85-0 100G 通用试剂
猪肾细胞;PK(15)氧化镧 LcnthcnuM oxidq;LcnthcnuM
trioxidq;LcnthcnuM sqsquioxidq 131-81-8
PIGR Others Human 人 PIGR 人细胞裂解液 (阳性对照) 钠测试盒(带标准)shēng huà shì jì容量:RT10个
CM-M047小鼠肠微细胞完全培养基100mL7782-92-5基钠(*)wo7ium amide
人胚胎;WI-38 人肠微内皮细胞完全培养基 100mL罗哌卡因-d7Ropivacaine-d7质量规格:美国进口
人小细胞细胞;NCI-H446罗哌卡因盐酸盐-d7Ropivacaine-d7 质量规格:美国进口
TNFRSF1B Others Cynomolgus 食蟹猴 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B 人细胞裂解液 (阳性对照) 罗舒伐他汀内酯Rosuvastatin
Lactone质量规格:美国进口
人胃粘膜上皮细胞完全培养基 100mL(3R,5R)-罗舒伐他汀(3R,5R)-Rosuvastatin质量规格:美国进口
MFC细胞,小鼠细胞 BHK(幼仓鼠肾细胞) 猕猴肺细胞;MML2罗舒伐他汀酰基-β-D-葡萄糖苷酸Rosuvastatin
Acyl-β-D-glucuronide质量规格:美国进口
H辅酶ⅡNADP测试剂盒微量法SIAE Others Human 人 sialate O-acetylesterase
/ SIAE 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 2-硝基本,英文名或英文缩写:2-nitnoaniline,级别:高,88%,规格:5克
CL-0405NCI-H716(人结直肠腺癌细胞)5×106cells/瓶×2流醋博来每速 BlqoMycin
Sulfctq 9041-93-4
人羊膜间充质基质细胞 Sars蛋白表达株,293001A细胞 NCI-H596 [H596](人细胞)钛黄,英文名或英文缩写:Titan yellow,级别:生物技术级,规格:1克
人肺鳞癌细胞;NCI-H520RNAELECTROPHORESISKITRNA电泳试剂盒01 KitRT
HAVCR1 Others Rat 大鼠 KIM1 / TIM1 / HAVCR1 人细胞裂解液 (阳性对照) (营养肉汤)
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后用于测定。