产品特点：

◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；

◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；

◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；

◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

参数规格：

产品名称：转基因构建FMV启动子-PLRY基因PCR试剂盒说明书

货号：LZR86142

产品规格：50次

产品运输：低温运输

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

产品特点：

产品仅用于科研本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。

需要注意：

PCR反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）与热启动法（Hot Start Method）相结合，更能有效地减少PCR过程中的非特异性反应，增强PCR扩增的特异性，能得到良好的PCR结果。

PCR的反应条件：

因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。

◇ 循环次数

根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。

如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。

◇ Anneal以及Extension

合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。

使用方法

一、样品 DNA 的制备

1.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个阳性对照和一个阴性对照。阳性对照是在 200μL 水中加 10μL PCR 阳性对照作为阳性对照，阴性对照是直接用 200μL 水作为阴性对照。提取结束后，*得到 200μL 模板 DNA（每个样品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否则PCR 抑制物很可能会抑制 PCR。二、PCR（60 μL 体系）

3.样品管：在 N+2 个PCR 管中加入下列成分：成分 N 个样品管 阴性对照 阳性对照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物对 各 2 μL 2 μL 2 μL 样品 DNA 模板 各 18 μL - - 阳性对照（纯化后） - 18 μL - 阴性对照（纯化后） - - 18 μL电泳检测

4.取 10-20 μL PCR 产物直接进行琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果样品为阳性，将会得到长度为 3582 bp 的扩增产物。

二反应的准备： 　　

待各组份融化后先瞬时离心，然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系，每次实验需加一个阴性和一个阳性对照，测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌，戴口罩，并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染，推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。 　　

三、PCR反应： 　　

降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃变性2分钟;首循环：94℃变性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;八个循环开始，每循环退火温度下降1℃，其余不变;从第九个循环开始，反应条件固定为：94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循环32次;循环结束后，在72℃延伸7分钟，*保持在4℃。

标准操作步骤：

产品仅用于科研如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1.液氮充分研磨样品。

2.收集研磨成粉末的50mg样品，置于1.5ml离心管中。

3.加入350μl65℃预热的缓冲液IL，并加入20μl蛋白酶K剧烈地漩涡振荡，确保所有的组织团都分散均匀。

4.65℃水浴20-30min。水浴期间颠倒样品数次。

5.加入350μl氯仿，充分混匀，12,000 rpm(~13,400×g)离心5分钟。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml离心管中。注意确保不要打散沉淀团或把组织碎片也一起转移。

7.加入4μl RNase A，涡旋混匀。室温放置2min。

8.加入二分之一上清体积的缓冲液IB与等体积的无水乙醇，充分混匀。如：向300μl上清中加入150μl缓冲液IB与300μl无水乙醇。

9.把上述混匀的液体转移到吸附柱上。10,000×g离心1 min以结合DNA，弃去滤出液体。纯化柱*容量为750μl,如果混合液大于750μl,请分两次过柱。

10.将吸附柱重新套回收集管中，加入500μl缓冲液WB至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；

11.将吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中，使用前须恢复到室温。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g离心1min,弃去流出液；

13.将吸附柱重新套回2ml收集管中，转速（>13000×g）离心空结合柱1min以干燥柱子的基质；这一步对下面的洗脱步骤至关重要。

14.将柱子置于1.5ml灭菌离心管，加入50-150μl65℃预热的洗脱缓冲液EB至柱子的膜中央。室温静置5min；

15. 室温下，离心(>13000)1min，以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。
40%Acrylamide/Bisacrylamide(37.5:1)　含量：暂不提供　规格：1ml，3ml

过铵APS　含量：暂不提供　规格：50次，200次

Ammonium persulfate　含量：暂不提供　规格：50μl，250μl

抗荧光衰减封片剂(强）　含量：暂不提供　规格：50μl，250μl

Antifade Mounting Medium　含量：暂不提供　规格：20次，50次

细胞凋亡与坏死检测试剂盒　含量：暂不提供　规格：20次，50次

Apoptosis and Necrosis Assay Kit　含量：暂不提供　规格：50次，100次

细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒　含量：暂不提供　规格：50次，100次

酰白藜芦;Acetyltrans CAS号： 42206940 规格： 20mg 订购|咨询

羊藿次苷II;Icarisid II CAS号： 113558159 规格： 20mg 订购|咨询

茵芋苷;Skimmin CAS号： 93390 规格： 20mg 订购|咨询

亚油;Methyl Linolea CAS号： 112630 规格： 100mg 订购|咨询

油;Methyl Oleate CAS号： 112629 规格： 100mg 订购|咨询

硬脂;Methyl Stearat CAS号： 112618 规格： 50mg 订购|咨询

酰蒲公英萜;Taraxeryl ac CAS号： 2189802 规格： 20mg 订购|咨询

异古伦宾;IsocoluMbin CAS号： 471545 规格： 20mg 订购|咨询

吲哚;6Hydroxyindole CAS号： 2380861 规格： 20mg 订购|咨询

原七叶皂苷元;Protoaescigen CAS号： 20853070 规格： 20mg 订购|咨询

盐吐根;EMetine Hydroc CAS号： 316427 规格： 20mg 订购|咨询

氧血根碱;Ethoxysanguin CAS号： 28342316 规格： 20mg 订购|咨询

远华蟾蜍精;Telocinobufagi CAS号： 472264 规格： 20mg 订购|咨询

氧槐定碱;Oxysophoridine CAS号： 54809744 规格： 20mg 订购|咨询

薏苡素;Coixol CAS号： 532912 规格： 20mg 订购|咨询

N,N′-Diphenylthiourea,98%大鼠干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10) 进口/国产

2-Imidazolidinetione,≥98.0%人凝溶胶蛋白(Gelsolin) 进口/国产

Allyl thiourea,98%小鼠凝溶胶蛋白(Gelsolin) 进口/国产

N-Phenylurea,97%大鼠凝溶胶蛋白(Gelsolin) 进口/国产

Aminourea hydrochloride,≥99%人结蛋白(Des) 进口/国产

Tetramethylurea,99%小鼠结蛋白(Des) 进口/国产

Acetone semicarbazone,97%大鼠结蛋白(Des) 进口/国产

Thiurea dioxide,≥98%人心肌转录因子GATA4  进口/国产
转基因构建FMV启动子-PLRY基因PCR试剂盒说明书Alcanivorax│venustensis分离基物: 沉积物/TVMC沉积物/TVMC沉积物/TVMC沉积物(21-25cm)提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 潜在的有机污染物降解菌/分离自石油富集菌群培养基: 821生长条件: 28℃存储条件: 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

Azotobacter│sp.分离基物: 土壤提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 固氮。培养基: 3生长条件: 28-30存储条件: 定期移植法

Rhizoctonia│solani提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 用于水稻纹枯病菌的多样性研究培养基: 14生长条件: 28℃存储条件: 真空冷冻干燥法

Aspergillus│niger提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 14生长条件: 28℃存储条件: 定期移植法

Acremonium│sp.分离基物: 水样/下层海水提供形式: 斜面培养物模式菌株: no应用领域: 大洋丝状真菌培养基: 475生长条件: 25℃存储条件: 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

Lentinula│edodes提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 0014生长条件: 25℃存储条件: 液氮超低温冻结法；矿物油法；定期移植法

Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 酿造葡萄酒。培养基: CM0077生长条件: 28-30℃存储条件: 真空冷冻干燥法；定期移植法

Penicillium│sp.分离基物: 土壤提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 生理活性物质；退行性疾病培养基: CM0014生长条件: 28C存储条件: -80℃冰箱冻结

Verticillium│dahliae提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 0014生长条件: 25℃