参数规格：

产品名称：转基因元件FMV35S启动子探针法qPCR试剂盒说明书

货号：LZR86046

产品规格：50次

产品运输：低温运输

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

产品特点：

产品仅用于科研本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。

产品特点：

◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；

◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；

◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；

◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

需要注意：

PCR反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）与热启动法（Hot Start Method）相结合，更能有效地减少PCR过程中的非特异性反应，增强PCR扩增的特异性，能得到良好的PCR结果。

PCR的反应条件：

因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。

◇ 循环次数

根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。

如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。

◇ Anneal以及Extension

合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。

使用方法

一、样品 DNA 的制备

1.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个阳性对照和一个阴性对照。阳性对照是在 200μL 水中加 10μL PCR 阳性对照作为阳性对照，阴性对照是直接用 200μL 水作为阴性对照。提取结束后，*得到 200μL 模板 DNA（每个样品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否则PCR 抑制物很可能会抑制 PCR。二、PCR（60 μL 体系）

3.样品管：在 N+2 个PCR 管中加入下列成分：成分 N 个样品管 阴性对照 阳性对照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物对 各 2 μL 2 μL 2 μL 样品 DNA 模板 各 18 μL - - 阳性对照（纯化后） - 18 μL - 阴性对照（纯化后） - - 18 μL电泳检测

4.取 10-20 μL PCR 产物直接进行琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果样品为阳性，将会得到长度为 3582 bp 的扩增产物。

二反应的准备： 　　

待各组份融化后先瞬时离心，然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系，每次实验需加一个阴性和一个阳性对照，测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌，戴口罩，并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染，推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。 　　

三、PCR反应： 　　

降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃变性2分钟;首循环：94℃变性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;从八个循环开始，每循环退火温度下降1℃，其余不变;从第九个循环开始，反应条件固定为：94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循环32次;循环结束后，在72℃延伸7分钟，*保持在4℃。

培哚普利叔丁胺盐英文名称：Perindopril tert - Ding Anyan人质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)ELISA试剂盒规格：100mg保存：-20℃，避光

培哚普利杂质S9780（培哚普利拉）英文名称：Perindopril impurity S9780 (perindoprilat)人质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA试剂盒规格：50mg保存：-20℃，避光

培氟沙星英文名称：Pefloxacin大鼠骨桥素(OPN)ELISA试剂盒规格：100mg保存：-20℃，避光

培美曲塞二钠D-异构体英文名称：Pemetrexed sodium two D- isomers人抗DNA酶B抗体(anti-DNase B)ELISA试剂盒 规格：30mg保存：-20℃，避光

佩兰英文名称：Perrin鸡可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒规格：1g保存：-20℃，避光

喷昔洛韦英文名称：Penciclovir人抗平滑肌抗体(ASMA)ELISA试剂盒规格：100mg保存：-20℃，避光

蟛蜞菊内英文名称：Wedelolactone兔子白介素1β (IL-1β)ELISA试剂盒规格：HPLC≥98% 20mg/支保存：-20℃，避光

披麻草英文名称：Hemp grass大鼠内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒 规格：0.5g保存：-20℃，避光

枇杷叶英文名称：Loquat leaf人抗糖蛋白抗体(GP)ELISA试剂盒规格：1g保存：-20℃，避光

匹多莫德英文名称：Pi do Maude人胚胎性糖蛋白抗原(FSA)ELISA试剂盒 规格：100mg保存：-20℃，避光

匹林(精神药品)英文名称：Pemoline (psychotropic drugs)人胰蛋白酶原Ⅱ(Try-Ⅱ)ELISA试剂盒 规格：50mg保存：-20℃，避光

片姜黄英文名称：Pian Jianghuang人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒规格：1g保存：-20℃，避光

平贝母英文名称：Fritillaria ussuriensis人P选择素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA试剂盒规格：5g保存：-20℃，避光

苹果、DL-苹果英文名称：Malic acid, DL- malic acid小鼠促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒规格：HPLC≥98% 20mg/支保存：-20℃，避光

泼尼松英文名称：Prednisone人心型脂肪结合蛋白(h-FABP)ELISA试剂盒 规格：100mg保存：-20℃，避光

Petroleum ether大鼠生成素4(ANG-4) 进口/国产

tert-Butyl methyl ether,99.8%人激肽释放酶11(KLK 11) 进口/国产

4,4′-(1-Phenylethylidene)bisphenol,99%大鼠白细胞分抗原44(CD44) 进口/国产

6-Amino-o-cresol,92%兔阿霉素(ADR) 进口/国产

4-Bromocatechol,≥98.0%人神经生长导向因子Slit2  进口/国产

4-Nitro-3-(trifluoromethyl)phenol,99%小鼠神经生长导向因子Slit2  进口/国产

2-Nitro-4-(trifluoromethyl)phenol,99%人多巴胺D2受体(D2R) 进口/国产

4-Fluoro-2-nitrophenol,99%大鼠多巴胺D2受体(D2R) 进口/国产
转基因元件FMV35S启动子探针法qPCR试剂盒说明书Bacillus│muralis分离基物: 海水提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 分类学及海洋微生物研培养基: 0223生长条件: 30℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

伤寒沙门氏菌种属: Salmonella│typhi提供形式: 冻干物安全等级: 2模式菌株: no应用领域: 噬菌体分型用 Vi 54　　　9,12,Vi　d　-培养基: CM0051生长条件: 37℃存储条件: 真空冷冻干燥法

Micromonospora│sp.分离基物: 湖底泥提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 筛选菌株：；抗金黄色葡萄球菌；抗枯草芽孢杆菌；；抗白色念株菌；抗黑曲霉培养基: CM0012生长条件: 35-37C存储条件: 真空冷冻干燥

Mucor│circinelloides f. griseocyanus提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 0014生长条件: 25-28℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

Bacillus│sp.分离基物: 植物根际土壤提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 0033生长条件: 28℃存储条件: -80℃冰箱冻结法

Sclerotinia│sclerotiorum提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 0014生长条件: 25℃

Streptomyces│venezuelae分离基物: 土壤提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 土壤微生物资源调查及分类学研究培养基: 12生长条件: 28℃存储条件: 真空冷冻干燥法

Streptomyces│sp.分离基物: 表面土壤提供形式: 其他安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 分类学及微生物药物学的研究培养基: 12生长条件: 28℃存储条件: 其他

Pseudomonas│aeruginosa提供形式: 冻干物安全等级: 2模式菌株: no培养基: CM0051生长条件: 37℃存储条件: 真空冷冻干燥法
标准操作步骤：

产品仅用于科研如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1.液氮充分研磨样品。

2.收集研磨成粉末的50mg样品，置于1.5ml离心管中。

3.加入350μl65℃预热的缓冲液IL，并加入20μl蛋白酶K剧烈地漩涡振荡，确保所有的组织团都分散均匀。

4.65℃水浴20-30min。水浴期间颠倒样品数次。

5.加入350μl氯仿，充分混匀，12,000 rpm(~13,400×g)离心5分钟。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml离心管中。注意确保不要打散沉淀团或把组织碎片也一起转移。

7.加入4μl RNase A，涡旋混匀。室温放置2min。

8.加入二分之一上清体积的缓冲液IB与等体积的无水乙醇，充分混匀。如：向300μl上清中加入150μl缓冲液IB与300μl无水乙醇。

9.把上述混匀的液体转移到吸附柱上。10,000×g离心1 min以结合DNA，弃去滤出液体。纯化柱*容量为750μl,如果混合液大于750μl,请分两次过柱。

10.将吸附柱重新套回收集管中，加入500μl缓冲液WB至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；

11.将吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中，使用前须恢复到室温。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g离心1min,弃去流出液；

13.将吸附柱重新套回2ml收集管中，*转速（>13000×g）离心空结合柱1min以干燥柱子的基质；这一步对下面的洗脱步骤至关重要。

14.将柱子置于1.5ml灭菌离心管，加入50-150μl65℃预热的洗脱缓冲液EB至柱子的膜中央。室温静置5min；

15. 室温下，离心(>13000)1min，以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。