参数规格：

产品名称：转基因品系玉米GA21XMON810染料法qPCR试剂盒规格

货号：LZR85908

产品规格：50次

产品运输：低温运输

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

产品特点：

产品仅用于科研本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。

产品特点：

◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；

◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；

◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；

◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

需要注意：

PCR反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）与热启动法（Hot Start Method）相结合，更能有效地减少PCR过程中的非特异性反应，增强PCR扩增的特异性，能得到良好的PCR结果。

PCR的反应条件：

因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。

◇ 循环次数

根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。

如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。

◇ Anneal以及Extension

合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。

使用方法

一、样品 DNA 的制备

1.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒DNAout。

2.如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个阳性对照和一个阴性对照。阳性对照是在 200μL 水中加 10μL PCR 阳性对照作为阳性对照，阴性对照是直接用 200μL 水作为阴性对照。提取结束后，*得到 200μL 模板 DNA（每个样品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否则PCR 抑制物很可能会抑制 PCR。二、PCR（60 μL 体系）

3.样品管：在 N+2 个PCR 管中加入下列成分：成分 N 个样品管 阴性对照 阳性对照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物对 各 2 μL 2 μL 2 μL 样品 DNA 模板 各 18 μL - - 阳性对照（纯化后） - 18 μL - 阴性对照（纯化后） - - 18 μL电泳检测

4.取 10-20 μL PCR 产物直接进行琼脂糖凝胶电泳（本产品不需要单独加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果样品为阳性，将会得到长度为 3582 bp 的扩增产物。

二反应的准备： 　　

待各组份融化后先瞬时离心，然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系，每次实验需加一个阴性和一个阳性对照，测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌，戴口罩，并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染，推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。 　　

三、PCR反应： 　　

降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃变性2分钟;首循环：94℃变性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;从八个循环开始，每循环退火温度下降1℃，其余不变;从第九个循环开始，反应条件固定为：94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循环32次;循环结束后，在72℃延伸7分钟，*保持在4℃。

Phire Plant Direct PCR Kit (without sampling tools)

Phire Animal Tissue Direct PCR Kit (without sampling tools)

Phusion Human Specimen Direct PCR Kit

Phire Plant Direct PCR Master Mix

Phire Plant Direct PCR Master Mix

Phire Tissue Direct PCR Master Mix

Phire Tissue Direct PCR Master Mix

Phusion Blood Direct PCR Master Mix

Phusion Blood Direct PCR Master Mix

PHUSION HF BUFFER PACK - 6 ML

PHUSION GC BUFFER PACK - 6 ML

PHUSION HF BUFFER PACK

DETERGENT-FREE PHUSION GC

PHIRE REACTION BUFFER - 6 ML

PHIRE REACTION BUFFER

PHIRE GREEN REACTION BUFFER

Phusion High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL)
转基因品系玉米GA21XMON810染料法qPCR试剂盒规格Aspergillus│flavus提供形式: 冻干物安全等级: 2模式菌株: no应用领域: 产生果胶酶培养基: 0015生长条件: 25-28℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

汉逊德巴利酵母fabryi亚种种属: Debaryomyces│hansenii var. fabryi提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 0013生长条件: 25-28℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

Sphingopyxis│flavimaris分离基物: 沉积物/表层沉积物提供形式: 斜面培养物模式菌株: no应用领域: *微生物/耐冷菌培养基: 471生长条件: 15℃存储条件: 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

清酒乳杆菌清酒亚种种属: Lactobacillus sakei subsp. sakei分离基物: 清酒自动发酵剂提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: yes应用领域: 培养基质控，分类学研究。培养基: MRS培养基：酪蛋白胨10.0 g，牛肉提取物10.0 g，酵母提取物5.0 g，葡萄糖5.0 g，乙酸钠5.0 g，柠檬酸二氨2.0 g，吐温80 1.0 g，K2HPO4 2.0 g，MgSO4·7H2O 0.02g，MnSO4·H2O 0.05 g，CaCO3 20.0 g，蒸馏水1000毫升，pH 6.8。生长条件: 37℃，微好氧，2-3天存储条件: -80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

Staphylococcus│aureus分离基物: 患病奶牛提供形式: 冻干物安全等级: 2模式菌株: no应用领域: 用于科研培养基: 335生长条件: 37存储条件: 真空冷冻干燥法;

Escherichia│coli分离基物: 死亡仔猪十二指肠提供形式: 冻干物安全等级: 2模式菌株: no应用领域: 用于科研培养基: 335生长条件: 37存储条件: 真空冷冻干燥法;

血液链球菌种属: Streptococcus│sanguis提供形式: 冻干物安全等级: 3模式菌株: no培养基: CM0109生长条件: 37℃存储条件: 真空冷冻干燥法

Chaetomium│sp.分离基物: 土壤提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 生理活性物质；抗凝血培养基: CM0014生长条件: 28C存储条件: -80℃冰箱冻结

Beauveria│bassiana提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 昆虫生物防治培养基: 0014生长条件: 25-28℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法
标准操作步骤：

产品仅用于科研如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1.液氮充分研磨样品。

2.收集研磨成粉末的50mg样品，置于1.5ml离心管中。

3.加入350μl65℃预热的缓冲液IL，并加入20μl蛋白酶K剧烈地漩涡振荡，确保所有的组织团都分散均匀。

4.65℃水浴20-30min。水浴期间颠倒样品数次。

5.加入350μl氯仿，充分混匀，12,000 rpm(~13,400×g)离心5分钟。

6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml离心管中。注意确保不要打散沉淀团或把组织碎片也一起转移。

7.加入4μl RNase A，涡旋混匀。室温放置2min。

8.加入二分之一上清体积的缓冲液IB与等体积的无水乙醇，充分混匀。如：向300μl上清中加入150μl缓冲液IB与300μl无水乙醇。

9.把上述混匀的液体转移到吸附柱上。10,000×g离心1 min以结合DNA，弃去滤出液体。纯化柱*容量为750μl,如果混合液大于750μl,请分两次过柱。

10.将吸附柱重新套回收集管中，加入500μl缓冲液WB至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；

11.将吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中，使用前须恢复到室温。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g离心1min,弃去流出液；

13.将吸附柱重新套回2ml收集管中，*转速（>13000×g）离心空结合柱1min以干燥柱子的基质；这一步对下面的洗脱步骤至关重要。

14.将柱子置于1.5ml灭菌离心管，加入50-150μl65℃预热的洗脱缓冲液EB至柱子的膜中央。室温静置5min；

15. 室温下，离心(>13000)1min，以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。