- 品牌:联祖
- 产地:进口、国产
- 货号:LZR85781
- 发布日期: 2020-11-25
- 更新日期: 2024-09-20
产地 | 进口、国产 |
品牌 | 联祖 |
货号 | LZR85781 |
用途 | 公司产品仅用于科研 |
包装规格 | 50次 |
纯度 | % |
CAS编号 | |
是否进口 | 是 |
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
参数规格:
产品名称:转基因品系油菜Oxy235染料法qPCR试剂盒供应商
货号:LZR85781
产品规格:50次
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
产品仅用于科研本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
需要注意:
PCR反应液请在冰中配制,然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法(Cool Start Method)与热启动法(Hot Start Method)相结合,更能有效地减少PCR过程中的非特异性反应,增强PCR扩增的特异性,能得到良好的PCR结果。
PCR的反应条件:
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小,设定25~30个循环。
如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45~68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外,由于在60~68℃间,也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时,每kbp大体可设定30秒~1分钟;当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常,Anneal温度太高,有时会得不到扩增产物;Anneal温度太低时,容易发生非特异性反应。另外,Extension时间太短时,会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成;而Extension时间太长时,会出现Smear。
使用方法
一、样品 DNA 的制备
1.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个阳性对照和一个阴性对照。阳性对照是在 200μL 水中加 10μL PCR 阳性对照作为阳性对照,阴性对照是直接用 200μL 水作为阴性对照。提取结束后,*得到 200μL 模板 DNA(每个样品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL,否则PCR 抑制物很可能会抑制 PCR。二、PCR(60 μL 体系)
3.样品管:在 N+2 个PCR 管中加入下列成分:成分 N 个样品管 阴性对照 阳性对照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物对 各 2 μL 2 μL 2 μL 样品 DNA 模板 各 18 μL - - 阳性对照(纯化后) - 18 μL - 阴性对照(纯化后) - - 18 μL电泳检测
4.取 10-20 μL PCR 产物直接进行琼脂糖凝胶电泳(本产品不需要单独加loading buffer),使用 100 bp DNA Marker,如果样品为阳性,将会得到长度为 3582 bp 的扩增产物。
二反应的准备:
待各组份融化后先瞬时离心,然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系,每次实验需加一个阴性和一个阳性对照,测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌,戴口罩,并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染,推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。
三、PCR反应:
降落PCR法(Touchdown PCR):94℃变性2分钟;首循环:94℃变性30秒,68℃退火30秒,72℃延伸45秒;八个循环开始,每循环退火温度下降1℃,其余不变;从第九个循环开始,反应条件固定为:94℃变性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸45秒,循环32次;循环结束后,在72℃延伸7分钟,*保持在4℃。
标准操作步骤:
产品仅用于科研如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1.液氮充分研磨样品。
2.收集研磨成粉末的50mg样品,置于1.5ml离心管中。
3.加入350μl65℃预热的缓冲液IL,并加入20μl蛋白酶K剧烈地漩涡振荡,确保所有的组织团都分散均匀。
4.65℃水浴20-30min。水浴期间颠倒样品数次。
5.加入350μl氯仿,充分混匀,12,000 rpm(~13,400×g)离心5分钟。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml离心管中。注意确保不要打散沉淀团或把组织碎片也一起转移。
7.加入4μl RNase A,涡旋混匀。室温放置2min。
8.加入二分之一上清体积的缓冲液IB与等体积的无水乙醇,充分混匀。如:向300μl上清中加入150μl缓冲液IB与300μl无水乙醇。
9.把上述混匀的液体转移到吸附柱上。10,000×g离心1 min以结合DNA,弃去滤出液体。纯化柱*容量为750μl,如果混合液大于750μl,请分两次过柱。
10.将吸附柱重新套回收集管中,加入500μl缓冲液WB至柱子中,10,000×g离心1min,倒弃流出液;
11.将吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g离心1min,倒弃流出液;
注意:DNA Wash Buffer使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中,使用前须恢复到室温。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g离心1min,弃去流出液;
13.将吸附柱重新套回2ml收集管中,转速(>13000×g)离心空结合柱1min以干燥柱子的基质;这一步对下面的洗脱步骤至关重要。
14.将柱子置于1.5ml灭菌离心管,加入50-150μl65℃预热的洗脱缓冲液EB至柱子的膜中央。室温静置5min;
15. 室温下,离心(>13000)1min,以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。
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小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)elisa分析检测试剂盒Phospho-TSC2 Antibody Sampler Kit100 ul
小鼠白介素35(IL-35)elisa分析检测试剂盒NKCC1 (D13A9) Rabbit mAb100μl
小鼠c-fos elisa分析检测试剂盒PRDM14 (E1D5S) XP® Rabbit mAb20μl
山羊雌二醇(E2)elisa分析检测试剂盒PRDM14 (E1D5S) XP® Rabbit mAb100 ul
犬γ干扰素(IFN-γ)elisa分析检测试剂盒WT1 (D8I7F) XP® Rabbit mAb1 Kit
犬25羟基维生素D3(25 HVD3)elisa分析检测试剂盒DUB Antibody Sampler Kit1 Kit
转基因品系油菜Oxy235染料法qPCR试剂盒供应商Phyllosticta│eriobotryae Thüm.分离基物: 叶片提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 14生长条件: 26存储条件: 定期移植法
Streptomyces│sp.提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 生理活性物质,人白介素-1β转化酶抑制活性培养基: CM0038生长条件: 28C存储条件: -80℃冰箱冻结
Rhizobium│sp.分离基物: 珍珠叶相思提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 63生长条件: 28存储条件: 定期移植法
Micromonospora│sp.分离基物: 树根土提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: ;抗金黄色葡萄球菌;抗枯草芽孢杆菌培养基: CM0012生长条件: 35-37C存储条件: 真空冷冻干燥
穗产色链霉菌种属: Streptomyces│racemochromogenes提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: yes应用领域: Type strain. Produces racemomycine complex, strept培养基: 0038生长条件: 28℃存储条件: 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法
Orthoreovirus│Avian orthoreovirus分离基物: 鹅提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 研究培养基: 0生长条件: 37存储条件: 真空冷冻干燥法;
Debaryomyces│hansenii分离基物: 生物样/海藻提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no应用领域: 近海酵母培养基: 513生长条件: 28℃存储条件: 液氮超低温冻结法;-80℃冰箱冻结法
Botryosphaeria│ribis Grossenb. & Duggar分离基物: 树皮上小瘤提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 14生长条件: 28存储条件: 定期移植法
Monilinia│fructicola (G. Winter) Honey分离基物: 自然果提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no培养基: 14生长条件: 22-25存储条件: 定期移植法