PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

孟氏假单胞菌DHVD3 (1,25-Dihydroxyvitamin D3) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas mandelii

HIV假病毒 Z20-11VD4 (Vitamin D4) ELISA Kit规格: 1mL

纺锤形赖氨酸芽孢杆菌VE (Vitamin E) ELISA Kit拉丁属名: Lysinibacillus  fusiformis

卷枝毛霉VK1 (Vitamin K1) ELISA Kit拉丁属名: Mucor circinelloides

巨型艾美耳球虫MEK (Methionine-Enkephalin) ELISA Kit                                                                                                                                                                                                 拉丁属名: maxima

谷氨酸棒杆菌LEK (Leucine-Enkephalin) ELISA Kit拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

草菇PGI2 (Prostacyclin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

金黄色葡萄球菌ACSDKP (N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

铜绿假单胞菌HYD (Hydrocortisone) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  aeruginosa

构巢曲霉LPS (Lipopolysaccharides) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus nidulans

家园鬼伞GSH (Glutathione) ELISA Kit用途: 资源真菌

杏鲍菇LAM (Lipoarabinomannan) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

苏云金芽孢杆菌8-OHdG (8-Hydroxydeoxyguanosine) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus thuringiensis

热带头梗霉OT (Oxytocin) ELISA Kit拉丁属名: Cephaliophora tropica

香蕉Cortisol ELISA Kit用途: 植物病原菌
溶藻弧菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书大鼠白介素9(IL-9)ELISA试剂盒英文名称：Rat Interleukin 9,IL-9 ELISA Kit进口/原装

大鼠白三烯B4(LTB4)ELISA试剂盒英文名称：Rat Leukotriene B4,LT-B4 ELISA Kit进口/原装

大鼠白三烯C4(LTC4)ELISA试剂盒英文名称：Rat Leukotriene C4,LT-C4 ELISA Kit进口/分装

ER- Alpha(phospho-Tyr537)peptide 磷酸化雌激素受体α抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

极光激酶B Anti-Aurora B 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-EGFR (Thr693) 磷酸化表皮生长因子受体 规格 0.1ml

D-MEM/F-12培养基(原装) 10×1L Gibco

CD2 英文名称： CD2 0.1ml

Anti-DNA PKcs DNA依赖蛋白激酶催化亚基Multi-class antibodies规格： 0.2ml

M-CSFR(Human Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptor,M-CSFR) ELISA Kit 人巨噬细胞集落刺激因子受体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-FOXJ1/HFH-4 叉头蛋白J1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的小鼠抗兔IgG 规格 0.1ml

SM(Human sphingomyelin) ELISA Kit 人鞘磷脂 96T

SP-A 英文名称： 肺表面活性蛋白A 0.1ml

CHCHD5 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白CHCHD5 0.2ml

Anti-CD72/Ly-32 CD72蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

SLC34A2/NaPi-2b(Solute carrier family 34 member 2) 磷酸钠协同转运蛋白抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Bmi1/PCGF4 组蛋白相关Bmi1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PGBD3 PGBD3蛋白 规格 0.2ml

EGFR 表皮生长因子受体 浓缩液 0.1ml 进口分装

THEG4/C1orf223 英文名称： 高表达蛋白4 0.1ml

Crkl 英文名称： 接头蛋白CrkL 0.2ml

Anti-PI3K p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) 磷酸化磷脂酰肌醇激酶Multi-class antibodies规格： 0.1ml

GSH-Px(Human Glutathione peroxidase) ELISA Kit 人谷胱甘肽过氧化酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-MC-1R 黑皮质素-1受体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Junctophilin 3 连接蛋白JPH3 规格 0.2ml

ADV-Ag(Human Adenovirus Antigen) ELISA Kit 人腺病毒抗原 96T

phospho-p107(Thr369) 英文名称： 磷酸化视网膜母细胞瘤样蛋白p107 0.1ml