PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

洋葱伯克霍尔德菌RANκL (Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B Ligand) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

球孢白僵菌VEGFR-2/KDR (Vascuoar Endothelial Growth Factor Receptor 2) ELISA Kit 用途: 生物防治

蘑菇假单胞菌HGF (Hepatocyte Growth Factor) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas agarici

大肠埃希氏杆菌Hepc (Hepcidin) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia  coli

木豆根瘤菌hs-CRP (high sensitivity C-Reactive Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

土地杆菌属HIF-1α (Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Pedobacter  kyungheensis

仙人掌有孢汉逊酵母IgE (Immunoglobulin E) ELISA Kit拉丁属名: Hanseniaspora opuntiae

硬水黄杆菌IgG (Immunoglobulin G) ELISA Kit拉丁属名: Flavobacterium aquidurense

细极链格孢IgG1 (Immunoglobulin G1) ELISA Kit拉丁属名: Alternaria tenuissima

无色壳囊孢IgM (Immunoglobulin M) ELISA Kit用途: 代谢产物

红根须腹菌NOS2/iNOS (Nitric Oxide Synthase 2, Inducible) ELISA Kit用途: 属外生菌根菌

酿酒酵母IFN-α (Interferon Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

根癌土壤杆菌IL-9 (Interleukin 9) ELISA Kit 拉丁属名: Agrobacterium  tumefaciens

嗜糖土地芽孢杆菌IL-12 (Interleukin 12) ELISA Kit 拉丁属名: Terribacillus saccharophilus

耐寒短杆菌IL-16 (Interleukin 16) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
猿猴锥虫探针法荧光定量PCR试剂盒规格5-羟色胺受体4 Anti-5-HTR4 0.1ml

Anti-WDR26 /Gold 胶体金离子标记Gβ类似蛋白WDR26IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-FOXO4 (Ser262) 磷酸化叉头蛋白4 规格 0.1ml

c-Myc tag c-Myc tag标签多肽Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人癌胚抗原(CEA/CD66)ELISA试剂盒英文名称：Human carcinoembryonic antign,CEA ELISA Kit进口/原装

人癌胚铁蛋白(CEF) ELISA试剂盒英文名称：Human Carcinoembryonic Ferritin,CEF ELISA Kit进口/分装

人艾柯病毒IgM(ECHO IgM)ELISA试剂盒英文名称：human EchoVirus IgM，ECHO IgM ELISA Kit特价供应

CD150 英文名称： 信号淋巴细胞活化分子CD150 0.2ml

Anti-HSP105 热休克蛋白105Multi-class antibodies规格： 0.1ml

dsDNA(Human anti-double stranded DNA) ELISA KIT 人抗双链DNA/天然DNAMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-Integrin alpha 3/CD49c 整合素α3Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh LIR-6 白球蛋白样受体6 规格 0.2ml

PS(Human phosphatidylserine) ELISA Kit 人磷脂酰丝酸 96T

RINT1 英文名称： 胞膜间内质网调节蛋白1 0.2ml

Anti-beta-Amyloid(1-42) β淀粉样肽(1-42)Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-Bid (Ser65) 磷酸化BH3结构域凋亡诱导蛋白 规格 0.1ml

ELISA试剂盒开发服务(10kit以内) 次 西唐

VWF 英文名称： 假性因子/性因子 0.1ml

DPF2 英文名称： 双PHD-D4锌指蛋白2 0.2ml

Anti-beta-Amyloid(1-42) β淀粉样肽(1-42)Multi-class antibodies规格： 0.1ml

phospho-E2F1 (Ser364) 英文名称： 磷酸化转录因子E2F-1 0.1ml

CREG2 英文名称： E1A激活基因刺激蛋白2 0.2ml

Anti-E1 glycoprotein 病毒糖蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

ATG(Human anti-thymocyte globulin) ELISA Kit 人抗胸腺细胞球蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-IL-14/Taxilin alpha 白介素14Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh M2-PK/PKM2 丙酮酸激酶-M2 规格 0.1ml

ET(Human endotoxin) ELISA Kit 人内毒素 96T

RNA polymerase III 英文名称： RNA聚合酶III 0.2ml