PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

紫丁香蘑COL2 (Collagen Type Ⅱ) ELISA Kit用途: 松、榛、山杨等树木形成外生菌根

燕麦镰刀菌Cys-C (Cystatin C) ELISA Kit拉丁属名: Gibberella  avenacea

刺孢小克银汉霉轮生变种D-LDH (D-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit 拉丁属名: Cunninghamella echinulata var. verticillata

黄盖蜜环菌NOS3/eNOS (Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

蜜二糖假丝酵母ET-1 (Endothelin 1) ELISA Kit拉丁属名: Candida melibiosica

粪产碱杆菌ECF/CCL11 (Eosinophil Chemotactic Factor) ELISA Kit拉丁属名: Alcaligenes  faecalis

谷氨酸棒杆菌ENA-78 (Epithelial Neutrophil Activating Peptide 78) ELISA Kit拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

枯草芽孢杆菌SELE (E-Selectin) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis

彩色豆马勃FE (Ferritin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

双孢蘑菇FSH (follicle-stimulating hormone) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

柄孢壳F-TESTO (Free Testoterone) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

白地霉fT4 (Free Thyroxine) ELISA Kit拉丁属名: Geotrichum  candidum

海底德沃斯氏菌fT3 (Free Triiodothyronine) ELISA Kit拉丁属名: Devosia subaequoris

平田头菇GC (Glucagon) ELISA Kit  用途: 食用、科研

园弧青霉=桔灰青霉HB (Hemoglobin) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium cyclopium Westling=Penicillium aurantiogriseum
马媾疫锥虫探针法荧光定量PCR试剂盒供应商CD339/Jagged1 CD339/Jagged1抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

大鼠脱氢表雄酮(DHEA)ELISA试剂盒英文名称：Rat Dehydroepiandrosterone,DHEA ELISA Kit进口/分装

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大鼠脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉(DPD)ELISA试剂盒英文名称：Rat deoxypyridinoline,DPD ELISA Kit 特价促销

大鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA试剂盒英文名称：Rat advanced glycation end products,AGEs ELISA Kit特价供应

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sFRP-4(Secreted frizzled-related protein 4; Frizzled protein, human endometrium) 抗子宫内膜抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

CD147 英文名称： 细胞外基质金属蛋白酶诱导因子 0.1ml

Anti-EphB6 酪氨酸蛋白激酶受体B6Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rat Caspase-9 大鼠Caspase-9Multi-class antibodies规格： 48T

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Rhesus antibody Rh MUC13 粘蛋白13 规格 0.2ml

BCR(Human B cell receptor) ELISA Kit 人B细胞受体 96T

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人可溶性CD30配体(sCD30L)ELISA试剂盒 英文名称：Human Soluble Cluster of differentiation 30 ligand，sCD30L ELISA Kit 进口/原装

IL-1 ELISA Kit 大鼠白介素1Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Rat IgA/FITC 荧光素标记兔抗大鼠IgAMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Fibulin 5 衰老关键蛋白 规格 0.2ml

TrxR(Mouse thioredoxin reductase) ELISA Kit 小鼠硫氧还蛋白还原酶 96T

Uromucoid 英文名称： 尿调节蛋白 0.2ml

ABL2 英文名称： ABL2蛋白 0.1ml

CREB3L3 英文名称： 环腺苷酸应答元件结合蛋白H 0.2ml

Anti-Phospho-Nur77 (Ser351) 磷酸化孤儿核受体蛋白Nur77Multi-class antibodies规格： 0.1ml

GSK(Human glycogen synthase kinase) ELISA Kit 人糖原合成酶激酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Nrf2 核因子2相关因子2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IGF I 样生长因子1 规格 0.1ml

CT-1(Mouse cardiotrophln 1)ELISA Kit 小鼠心肌营养素1 96T

PTK5 英文名称： 胃肠道相关酪酸激酶(蛋白酪酸激酶5) 0.2ml