PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

平流层芽孢杆菌MUC6 (Mucin 6) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus stratosphericus

粪肠球菌CGβ (Chorionic Gonadotrophin Beta) ELISA Kit拉丁属名: Enterococcus  faecalis

红球菌NOS1/nNOS (Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal) ELISA Kit拉丁属名: Rhodococcus sp.

青霉属NOS2/iNOS (Nitric Oxide Synthase 2, Inducible) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium  sp.

布鲁氏菌NOS3/eNOS (Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial) ELISA Kit拉丁属名: abortus

藤黄微球菌F7 (Coagulation Factor VII) ELISA Kit拉丁属名: Micrococcus  luteus

贪噬菌F9 (Coagulation Factor IX) ELISA Kit拉丁属名: Variovorax boronicumulans

叶生布勒担子酵母F10 (Coagulation Factor X) ELISA Kit拉丁属名: Bulleribasidium foliicola

平菇F13 (Coagulation Factor XIII) ELISA Kit用途: 食用、药用

范巴伦氏分支杆菌F12 (Coagulation Factor XII) ELISA Kit拉丁属名: Mycobacterium  vanbaalenii

苹果黑腐皮壳F5 (Coagulation Factor V/Plasma Factor V) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

浅白隐球酵母F11 (Coagulation Factor XI) ELISA Kit 拉丁属名: Cryptococcus albidus

大肠埃希氏杆菌COL2 (Collagen Type Ⅱ) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia  coli

蜡状芽孢杆菌COL2α1 (Collagen Type II Alpha 1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus cereus

鲁氏接合酵母COL3α1 (Collagen Type III Alpha 1) ELISA Kit 拉丁属名: Zygosaccharomyces  rouxii
单端孢霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒供应商phospho-alpha B Crystallin (Ser59) 英文名称： 磷酸化热休克蛋白β5/αb晶体蛋白质/α-晶体蛋白b链 0.1ml

Anti-ART/FITC 荧光素标记胶质细胞系源性神经营养因子GDNF的一种IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

PSA(Mouse prostate specific antigen) ELISA Kit 小鼠特异性抗原Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CD158b2/KIR2DL3/NKAT2a/FITC 荧光素标记NK细胞抑制性受体2DL3IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Donkey Anti-human IgG/RBITC 罗丹明标记的驴抗人IgG 规格 0.1ml

HBcAb(IgM) 核心 IgM 96T

MRGX1 英文名称： G蛋白偶联受体MRGX1 0.1ml

CCZ1 英文名称： CCZ1蛋白 0.2ml

Anti-claudin 5 紧密连接蛋白-5Multi-class antibodies规格： 0.1ml

MMP-13(Human Matrix metalloproteinase 13) ELISA kit 人基质金属蛋白酶13Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-OPN 骨桥蛋白(分泌型磷蛋白1)人Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh ICAM5/Telencephalin 细胞间粘附分子5 规格 0.1ml

TSH(Mouse Thyroid Stimulating Hormone)ELISA Kit 小鼠促甲状腺素 96T

PCDH8 英文名称： 原钙粘附蛋白8 0.2ml

DNAH7 英文名称： 轴丝动力蛋白7 0.2ml

Anti-beta-Amyloid(1-28) β淀粉样肽(1-28)Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Phospho-EEF2k (Ser359) 英文名称： 磷酸化真核延伸因子激酶2 0.1ml

雄激素结合蛋白 Anti-ABP 0.1ml

Anti-WNK3 protein/FITC 荧光素标记丝氨酸/苏氨酸激酶家族成员的基因WNK3IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-Filamin A/FLNA (Ser2522) 磷酸化细丝蛋白A 规格 0.1ml

Claudin-11 peptide 少突胶质细胞跨膜蛋白抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

CPSA(C2F9) 英文名称： 复合特异性抗原单克隆 0.2ml

Anti-IFITM1/CD225 干扰素诱导跨膜蛋白1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

P Gamma(Human Peptide Gamma) ELISA Kit 人γ肽Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-hHb 人血红蛋白单克隆Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MKRN1/RNF61 环指蛋白61 规格 0.2ml

GSK(Human glycogen synthase kinase) ELISA Kit 人糖原合成酶激酶 96T

Resistin 英文名称： 抵抗素 0.1ml