PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

蜡状芽孢杆菌Canine CLU (Clusterin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

松口蘑Canine SCF (Stem Cell Factor) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

贝叶多孔菌Canine IL-1β (Interleukin 1 Beta) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

赤芝Canine IL-12 p40 (Interleukin 12 p40) ELISA Kit拉丁属名: Ganoderma lucidum

芽孢杆菌属Canine Pg (Progesterone) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  sp.

交链孢属Canine IFN-α (Interferon Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Alternaria sp.

胶孢Canine IFN-β (Interferon Beta) ELISA Kit用途: 教学科研，分类

勒仔树根瘤菌Canine IL-12 (Interleukin 12) ELISA Kit用途: 固氮。

根癌土壤杆菌（可订购）Canine T4 (Thyroxine) ELISA Kit拉丁属名: Agrobacterium tumefaciens

藤黄微球菌Canine TSHA (Thyroid Stimulating Hormone, Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Micrococcus  luteus

燕麦镰孢Canine PAI-1 (Plasminogen Activator Inhibitor-1) ELISA Kit拉丁属名: Fusarium avenaceum

产黄纤维单胞菌Canine S-100 (Soluble Protein-100) ELISA Kit用途: 利用纤维素能力强

碳样小单孢菌Canine INS (Insulin) ELISA Kit拉丁属名: Micromonospora carbonacea

转基因玉米NK603质粒分子标准物质Canine DMD (Dystrophin) ELISA Kit 拉丁属名: GBW10086

苏云金芽孢杆菌Canine Neopterin ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
鸽毛探针法荧光定量PCR试剂盒规格大鼠趋化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒英文名称：Rat Fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit特价供应

大鼠去甲肾上腺素(NA)ELISA试剂盒英文名称：rat Noradrenaline,NA ELISA Kit 特价供应

GLP-1 peptide 胰素样肽-1(多肽)Multi-class antibodies规格： 0.1mg

KLK3 KLK3 / Kallikrein 3 兔单抗 (PE) Human

Rhesus antibody Rh Phospho-Cyclin D1 (Thr286) 磷酸化cyclin D1 规格 0.1ml

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) 2ml 自产

ZDHHC-12 英文名称： 锌指蛋白Zdhhc12 0.2ml

CCM2 英文名称： 脑海绵状蛋白2 0.2ml

Anti-GAD67 谷氨酸脱羧酶-67Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Ret IgG ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白GMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-Ephrin B (Tyr298) 磷酸化Ephrin BMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MTUS1/Angiotensin II Type 2 Receptor 紧张素Ⅱ2型受体相互作用蛋白 规格 0.1ml

MBLR(Human Mannma binding lectin receptor) ELISA Kit 人甘露糖凝集素受体 96T

SerpinB2 英文名称： 纤溶酶原激活物抑制因子2/血浆酶原激活酶抑制因子-2 0.1ml

小鼠性因子/瑞斯托霉素辅因子(vWF)ELISA试剂盒英文名称：Mouse von Willebrand Factor,vWF ELISA Kit进口/分装

小鼠血红素氧合酶1(HO-1)ELISA试剂盒英文名称：Mouse heme oxygenase 1,HO-1 ELISA Kit进口/分装

HBXIP(Human hepatitis B virus X interacting protein) ELISA Kit 人病毒X蛋白相互作用蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-IRS1(Tyr1222) 磷酸化胰岛素受体底物-1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Leptin 瘦素 规格 0.1ml

ASD(Human Androstenedione) ELISA Kit 人雄 96T

TRAP2 英文名称： 坏死因子受体相关蛋白2 0.2ml

CP110 英文名称： 中心体蛋白110 0.2ml

Anti-IL-5 白细胞介素5Multi-class antibodies规格： 0.2ml

ALCAM(Human Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit 人白细胞活化黏附因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-matrix protein 2 (H1N1) 甲型病毒M2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MMP-15 基质金属蛋白酶-15 规格 0.1ml

PL-A2(Human Phospholipidase A2) ELISA Kit 人磷脂酶A2 96T

phospho-Ron(Ser1349) 英文名称： 磷酸化原癌基因c-Met相关酪酸激酶 0.1ml