PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

黑曲霉Sheep ANXA2 (Annexin A2) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  niger

溶组织梭菌Sheep S100A8 (S100 Calcium Binding Protein A8/Calgranulin A) ELISA Kit拉丁属名: histolyticum

立枯丝核菌Sheep TDP43 (Tar DNA Binding Protein 43KDa )ELISA Kit 拉丁属名: Thanatephorus cucumeris

枯草芽孢杆菌枯草亚种Sheep CX3CL1 (Chemokine C-X3-C-Motif Ligand) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis subsp. subtilis

甘蔗镰孢Sheep FASL/TNFSF6 (Factor Related Apoptosis Ligand) ELISA Kit 拉丁属名: Fusarium sacchari

链格孢Sheep α-CTx (Alpha Crosslaps) ELISA Kit拉丁属名: Alternaria alternata

哈氏弧菌Sheep VASPIN (Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor) ELISA Kit拉丁属名: Vibrio harveyi

辣椒枯萎Sheep fMet (Formylmethionine) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

长裙竹荪Sheep AR (Amphiregulin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

炭疽芽胞杆菌Sheep MRP1 (Multidrug Resistance Associated Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: anthracis

食品检测用副溶血性弧菌Sheep SELL (L-Selectin) ELISA Kit 拉丁属名: Vibrio parahaemolyticus for Food Analysis

芽胞杆菌Sheep SIGLEC1 (Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 1) ELISA Kit用途: 能于57℃、48小时内在含5g/l的LB培养基中将其表面张力从71.5 mN/m降到31mN/m，产生生物表面活性剂。

都柏林沙门氏菌Sheep HO2 (Heme Oxygenase 2) ELISA Kit 拉丁属名: dublin

芽孢杆菌Sheep CaN (Calcineurin) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus sp.

草菇Sheep CPN10 (Chaperonin 10) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
巴布亚旋毛虫探针法荧光定量PCR试剂盒供应商CD38(人) Anti-CD38 0.1ml

Anti-VEGF-B/FITC 荧光素标记内皮生长因子BIgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-Gria2 (Ser880) 磷酸化谷氨酸受体2 规格 0.1ml

CD82/KAI1 peptide 转移抑制蛋白1抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人S100蛋白(S-100)ELISA试剂盒英文名称：Human Soluble protein-100，S-100 ELISA Kit特价供应

人S100钙结合蛋白A8/钙粒蛋白A(S100A8)ELISA试剂盒英文名称：human S100 calcium binding protein A8/calgranulin A,S100A8 ELISA Kit特价促销

人S100钙结合蛋白A9/钙粒蛋白B(S100A9)ELISA试剂盒英文名称：human S100 calcium binding protein A9/calgranulin B,S100A9 ELISA Kit进口/原装

CCL26 英文名称： 嗜酸粒细胞趋化蛋白3 0.2ml

Anti-Phospho-HSL (Ser563) 磷酸化荷尔蒙敏感脂肪酶Multi-class antibodies规格： 0.1ml

MUC7(Human Mucin-7) ELISA Kit 人粘蛋白/粘液素7Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-HRH3/GPCR97 组织胺H3受体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Matriptase 2 膜型丝氨酸蛋白酶2 规格 0.2ml

COX-2(Human cyclooxygenase-2) ELISA Kit 人环加氧酶2 96T

RNF128 英文名称： 环指蛋白128 0.2ml

TRIM25 英文名称： 雌激素反应锌指蛋白 0.2ml

CDCA8 英文名称： 细胞分裂周期蛋白8 0.2ml

Anti-Phospho-cdc2 (Thr161) 磷酸化周期素依赖激酶2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

小鼠羟脯氨酸(Hyp)ELISA试剂盒英文名称：Mouse hydroxyproline,Hyp ELISA Kit特价促销

小鼠趋化因子(fractalkine/CX3CL1) ELISA试剂盒英文名称：Mouse fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit 特价促销

小鼠全段甲状旁腺素(i-PTH)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse intact Parathormone ,i-PTH ELISA Kit进口/分装

小鼠缺血修饰白蛋白(IMA)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Ischemia Modified Albumin,IMA ELISA Kit特价促销

COX5A 英文名称： 细胞色素c氧化酶5A 0.2ml

Anti-KCNC4/KV3.4 离子通道蛋白Kv3.4Multi-class antibodies规格： 0.2ml

17-OHCS(Human 17-Hydroxycorticosteroids) ELISA Kit 人17羟皮质类固醇Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho CSF1R (Tyr699) 磷酸化巨噬细胞集落刺激因子受体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh JNK3/MAPK10 氨基末端激酶3 规格 0.1ml

LP Ag(Human Legionella pneumophila antigen) ELISA Kit 人军团菌抗原 96T

Phosphoserine 英文名称： 磷酸化丝酸 0.1ml