PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

细交链孢Sheep PAR1 (Protease Activated Receptor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Alternaria tenuis Nees

异常毕赤酵母Sheep MSMβ (Microseminoprotein Beta) ELISA Kit拉丁属名: Pichia  anomala

枯草芽孢杆菌Sheep M-AChR M1 (Muscarinic Acetylcholine Receptor M1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

皮诺卡氏菌Sheep CASP1 (Caspase 1) ELISA Kit拉丁属名: Nocardia farcinica

桃色枝顶孢Sheep fFDFT1 (Farnesyl Diphosphate Farnesyltransferase 1) ELISA Kit拉丁属名: Acremonium persicinum

新月弯孢Sheep ATGA/TGAB (Anti-Thyroid-Globulin Antibody) ELISA Kit用途: 研究

长孢链霉菌Sheep 6-K-PG (6-Keto-prostaglandin) ELISA Kit用途: 代谢产物具有抗菌活性。

黄絮鳞鹅膏菌Sheep BMG/β2-MG (Beta-2-Microglobulin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

运动替斯崔纳菌Sheep DAT (Dopamine Transporter) ELISA Kit拉丁属名: Tistrella mobilis

水栖黄杆菌Sheep PKR1 (Prokineticin Receptor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Flavobacterium aquidurense

柠檬色短小杆菌Sheep MAP-2 (Microtubule Associated Protein 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

葡萄座腔菌Sheep F12 (Coagulation Factor Ⅻ) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

近缘弯孢Sheep α1-AT (Alpha 1-Antitrypsin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

木糖氧化无色杆菌Sheep VE-Cadherin (Vascular Endothelial Cadherin) ELISA Kit拉丁属名: Achromobacter xylosoxidans

牛病毒Sheep CYP1B1 (Cytochrome P450 1B1) ELISA Kit 拉丁属名: Bovine viral diarrhea virus
溃蚀齿密螺旋体探针法荧光定量PCR试剂盒规格Anti-ACA11 拟南芥ACA11Multi-class antibodies规格： 1ml

EphB1+EphB2 英文名称： 蛋白激酶受体B1+B2 0.2ml

丙氨酰tRNA合成酶2 Anti-AARS2 0.1ml

Anti-Wnt2B/FITC 荧光素标记信号通路Wnt2BIgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-FoxO3a (Ser294) 磷酸化叉头蛋白3A 规格 0.1ml

CNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2) 环核苷酸阳离子通道蛋白α2抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人cAMP反应元件结合蛋白(CREB)ELISA试剂盒英文名称：Human Cyclic AMP response element binding protein,CREB ELISA Kit进口/原装

CCL19 英文名称： 巨噬细胞炎性蛋白19 0.2ml

Anti-Phospho-IKK alpha/IKK beta (Ser180/Ser181) 磷酸化KB抑制蛋白激酶α/βMulti-class antibodies规格： 0.1ml

AGA(Human anti-gliadin antibody) ELISA Kit 人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-IKK gamma (Ser376) 磷酸化KB抑制蛋白激酶γMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MAG-a/b 髓鞘相关糖蛋白a/b 规格 0.1ml

Lp- Alpha(Human lipoprotein Alpha) ELISA Kit 人脂蛋白α 96T

RNF17 英文名称： 环指蛋白17 0.2ml

人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)ELISA试剂盒 英文名称：Human Lipoarabinomannan,LAM ELISA Kit进口/分装

ZNF300 (zinc finger protein ZNF300)- middle 锌指蛋白300(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5ml

Anti-CD339/Jagged1 Jagged1/CD339Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh OPG 骨保护蛋白/护骨素 规格 0.1ml

RELT Kit Human 人 RELT / TNFRSF19L ELISA配对 ELISA

Tuftsin 英文名称： Tuftsin蛋白 0.2ml

CRMP1 英文名称： 二氢嘧啶酶相关蛋白1 0.1ml

COUP-TF1 英文名称： 转录因子COUP1 0.2ml

Anti-Phospho-PAK2 (Ser20) 磷酸化p21激活激酶2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

MCT(Human mast cell tryptase) ELISA Kit 人肥大细胞类胰蛋白酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-NMDAR2A (Tyr1246) 磷酸化谷氨酸受体2AMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh IGFBP2 样生长因子结合蛋白2 规格 0.1ml

VE ELISA Kit 大鼠维生素E 96T

PKA regulatory subunit I beta 英文名称： 蛋白激酶受体相关1β 0.2ml