PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

大肠埃希氏杆菌Sheep EGR3 (Early Growth Response Protein 3) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia  coli

污黑腐皮壳Sheep APSA (Anti-Phosphatidyl Serine Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Valsa sordida Nitschke

假单胞菌Sheep MYH1 (Myosin Heavy Chain 1, Skeletal Muscle, Adult) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

小麦纹枯Sheep NUP133 (Nucleoporin 133kDa) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

荧光威克酵母Sheep PI3K (Phosphoinositide-3-Kinase) ELISA Kit拉丁属名: Wickerhamia fluorescens

酿酒酵母Sheep A-CoA (Acetyl Coenzyme A) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

Shinella kummerowiae Lin et al.Sheep AKA (Anti-Keratin Antibody) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

无色杆菌属Sheep DCLK1 (Doublecortin Like Kinase 1) ELISA Kit 拉丁属名: Achromobacter piechaudii

产虾青素鞘鞍单胞菌Sheep SPTAN1 (Alpha-Fodrin) ELISA Kit 拉丁属名: Sphingomonas astaxanthinifaciens

针猴头Sheep SOCS3 (Suppressors of Cytokine Signaling 3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

库尔勒海洋杆菌Sheep PK (Pyruvate Kinase, Liver And RBC) ELISA Kit 拉丁属名: Pontibacter korlensis

外外安德伦茨氏菌Sheep CLL1 (Collectin Liver 1) ELISA Kit拉丁属名: Lentzea waywayandensis

巴西果小克银汉霉Sheep APA (Anti-Phospholipid Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Cunninghamella bertholletiae

指状青霉Sheep MMP-3 (Matrix Metalloproteinase 3) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium digitatum

黄须腹菌Sheep ERα (Estrogen Receptor Alpha) ELISA Kit 用途: 属外生菌根菌
刚地弓形虫探针法荧光定量PCR试剂盒说明书人抗肾小管基底膜(TBM)ELISA试剂盒英文名称：Human tubular basement membrane antibogy,TBM ELISA Kit特价促销

人抗肾小球基底膜(GBM)ELISA试剂盒英文名称：Human glomerular basement membrane antibogy,GBM ELISA Kit特价供应

人抗鼠(HAMA)ELISA试剂盒 英文名称：Human antimous antibody,HAMA ELISA 特价促销

人抗双链DNA/天然DNA(dsDNA)ELISA试剂盒英文名称：Human anti-double stranded DNA,dsDNA ELISA Kit进口/原装

人抗髓磷脂IgA(AMA IgA)ELISA试剂盒 英文名称：Human anti-myelin antibody IgA,AMA IgA ELISA Kit进口/原装

PGC-1 Alpha(peroxisome proliferator-activated receptor- Gamma coactivator 1 Alpha) 过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-phospho-ATP citrate lyase(Ser455) 磷酸化三磷酸腺柠檬酸裂解酶Multi-class antibodies规格： 0.1ml

CCDCA 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白A 0.2ml

Anti-Kv1.3/PCN3 离子通道蛋白Kv1.3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

FPB(Human fibrinopeptide B) ELISA Kit 人血纤肽/纤维蛋白肽BMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-PTGEs 素E合成酶Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh HBAB/AKR1C2 胆汁酸结合蛋白DDH2 规格 0.2ml

GDH/GLDH(Human Glutamate dehydrogenase) ELISA Kit 人谷酸脱氢酶 96T

PUMA 英文名称： p53正向细胞凋亡调控因子 0.1ml

小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse Bone morphogenetic protein 2,BMP-2 ELISA Kit特价供应

小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Bone morphogenetic protein 4,BMP-4 ELISA Kit进口/原装

GCS (glucosylceramide synthase, GCS) 葡萄糖神经酰胺合成酶(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CD138/Syndecan-1 多配体蛋白聚糖1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PARP3 多腺苷二磷酸多聚酶3/多聚ADP-核糖聚合酶3 规格 0.2ml

NBL1 Kit Human 人 NBL1 / DAND1 / DAN ELISA配对 ELISA

TRP1 英文名称： 酪酸酶相关蛋白1 0.2ml

COPS4 英文名称： 信号转导蛋白亚基4 0.2ml

Anti-Cathepsin H 组织蛋白酶HMulti-class antibodies规格： 0.2ml

BKCa channels(calcium-activated potassium channel) 钙激活钾通道蛋白Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CTSG/CG 组织蛋白酶GMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PCDHGA11 原钙粘蛋白γA11 规格 0.2ml

SPARCL1 Kit Human 人 SPARCL1 / SPARC-like 1 ELISA配对 ELISA

phospho-Tau protein (Ser579) 英文名称： 磷酸化微管相关蛋白 0.1ml