PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

三叶草根瘤菌Sheep CNTN4 (Contactin 4) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

Acinetobacter soliSheep LZM (Lysozyme) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

少根根霉原变种Sheep FBLN5 (Fibulin 5) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus arrhizus var. arrhizus

异常汉逊酵母Sheep CD4 (Cluster of Differentiation 4) ELISA Kit拉丁属名: Hansenula  anomala

野牡丹尼尔氏酵母Sheep AAA (Anti-Albumin Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Bullera melastomae

球孢白僵菌Sheep ACTα2 (Actin Alpha 2, Smooth Muscle) ELISA Kit用途: 防治桃小食心虫

大肠杆菌Sheep MN (Metanephrine) ELISA Kit用途: 教学科研，构建大肠杆菌染色体确实菌株的出发菌株。

芽孢杆菌Sheep ET (Epitestosterone) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus sp.

黑曲霉Sheep GDF11 (Growth Differentiation Factor 11) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  niger

佛雷德里克斯堡假单胞菌Sheep GRα (Glucocorticoid Receptor Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas   frederiksbergensis

酿酒酵母Sheep PAI1 (Plasminogen Activator Inhibitor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

刺芹侧耳（杏鲍菇）Sheep D4R/DRD4 (Dopamine Receptor D4) ELISA Kit 拉丁属名: Pleurotus eryngii

枯草芽孢杆菌Sheep CBX3 (Chromobox Homolog 3) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  subtilis

大肠埃希氏菌Sheep GLβ (Galactosidase  Beta) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia coli

薄花边伞Sheep TLR9 (Toll-Like Receptor 9) ELISA Kit用途: 可食用
跗线螨属通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Rhesus antibody Rh phospho-HMGN1(Ser20+Ser24) 磷酸化高迁移率核小体结合蛋白1 规格 0.1ml

CCR-2A(C-C Chemokine receptor 2A) 细胞表面趋化因子受体2A抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人水通道蛋白2(AQP-2)ELISA试剂盒英文名称：Human Aquaporin 2，AQP-2 ELISA Kit进口/分装

人水通道蛋白3(AQP-3)ELISA试剂盒英文名称：Human Aquaporin 3,AQP-3 ELISA Kit进口/原装

人水通道蛋白4(AQP-4)ELISA试剂盒英文名称：Human Aquaporin 4,AQP-4 ELISA Kit进口/分装

人水通道蛋白5(AQP-5)ELISA试剂盒英文名称：Human Aquaporin 5,AQP-5 ELISA Kit特价供应

人水闸蛋白14(CLDN14)ELISA试剂盒英文名称：human claudin 14,CLDN14 ELISA Kit特价促销

CCDC64B 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白64B 0.1ml

Anti-p53BP1/53BP1 p53结合蛋白1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

MLZE(Human melanomaderived leucine zipper extra-nuclear factor) ELISA Kit 人黑素瘤衍生亮氨酸拉链额外核因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-TFAR19/PDCD5 凋亡相关蛋白TFAR19Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HN1/ARM2 雄激素调节蛋白2 规格 0.2ml

LH(Mouse luteotropic hormone)ELISA Kit 小鼠促黄体激素 96T

PRAME 英文名称： 优先表达抗原 0.2ml

人补体片段3c(C3c)ELISA试剂盒英文名称：Human Complement fragment 3c，C3c ELISA Kit进口/分装

人补体片断3a(C3a)ELISA试剂盒英文名称：Human Complement fragment 3a,C3a ELISA Kit进口/原装

lamin A 核纤层蛋白A抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-phospho-ALK/CD246(Tyr1278/1282/1283) 磷酸化间变型激酶Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-c-Abl(Tyr204) 磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl 规格 0.1ml

品名 规格 备注

Vitamin A 英文名称： 维生素A 0.1ml

Complement C3d fragment 英文名称： 补体C3d片段 0.1ml

Anti-Influenza A Virus Hemagglutinin 甲型病毒血凝素Multi-class antibodies规格： 0.1ml

EG-VEGF(Human Endocrine gland vascular endothelial growth factor) ELISA Kit 人腺来源的内皮生长因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-phospho-GSK-3 Beta(Thr390) 磷酸化葡萄糖合成激酶3βMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MMP-20 基质金属蛋白酶20 规格 0.1ml

PAP(Human Prostatic Acid Phosphatase) ELISA Kit 人酸性磷酸酶 96T

RGS14 英文名称： G蛋白信号调节因子14 0.1ml