PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

大肠埃希菌Sheep 6-OHDA (6-Hydroxydopamine) ELISA Kit拉丁属名: coli

玫瑰库克氏菌Sheep LRP6 (Low Density Lipoprotein Receptor Related Protein) ELISA Kit拉丁属名: Kocuria rosea

杰丁毕赤酵母Sheep MMP-13 (Matrix Metalloproteinase 13) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

季也蒙有孢汉逊酵母Sheep TSTA (Tumor Specific Transplantation Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Hanseniaspora guilliermondii

异常威克汉姆酵母Sheep OSMR (Oncostatin M Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Wickerhamomyces anomalus

苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种Sheep CA1 (Carbonic Anhydrase I) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus thuringiensis subsp. galleriae

费雷生刺枝霉Sheep AGPA (Anti-Glucoprotein 210 Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Chaetostylum fresenii

乳酒假丝酵母Sheep PHSA (Poly Serium Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Candida  kefyr

大肠埃希氏杆菌Sheep HSP-40 (Heat Shock Protein 40) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia  coli

抗生链霉菌Sheep DEFβ2 (Defensin Beta 2) ELISA Kit用途: 拮抗菌

粪肠球菌Sheep STAT3 (Signal Transducer and Activator of Transcription 3) ELISA Kit 拉丁属名: Enterococcus  faecalis

尖孢镰刀菌Sheep MMP-9 (Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

阪崎肠杆菌Sheep LT-E4 (Leukotriene E4) ELISA Kit拉丁属名: Enterobacter  sakazakii

苜蓿中华根瘤菌Sheep DMD (Dystrophin) ELISA Kit用途: 与苜蓿结瘤固氮效果很好

*拟蛹虫草Sheep LIPF (Lipase, Gastric) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
乳突类圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 兔尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)ELISA试剂盒 英文名称：Rabbit Urokinase-type Plasminogen Activator Receptor,PLAUR/uPAR ELISA Kit 特价促销

兔凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA试剂盒英文名称：Rabbit prothrombin fragment 1+2,F1+2 ELISA Kit 进口/原装

IL-5 大鼠白介素-5Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-DDAH-II 双甲基精氨酸水解酶2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NEGR1 神经生长调节蛋白1 规格 0.2ml

Human advanced oxidation protein products,AOPP ELISA Kit 人晚期氧化蛋白产物 96T

TTBK2 英文名称： Tau微管蛋白激酶2 0.2ml

CCDC46 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白46 0.2ml

Anti-P21/CDKN1A p21蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

PTK/CD115(Human protein tyrosine kinase) ELISA Kit 人蛋白酪氨酸激酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-NOS-2/iNOS 一氧化氮合成酶-2(诱导型)Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh IKK beta/IKB KB抑制蛋白激酶β 规格 0.1ml

IL-16 ELISA KIT 大鼠白介素16 96T

PI 3 Kinase p85 beta 英文名称： 磷脂酰肌醇激酶p85β 0.1ml

Galectin-3(human) 人半乳糖凝集素-3Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CPSF4/CPSF30 剪切和多聚腺苷酸化特异性因子4Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NMDA-NR1/NR1/NMDAR1 天冬氨酸受体 规格 0.1ml

Human Gliadin IgA ELISA Kit 人蛋白IgA 96T

TRAP1 英文名称： 热休克蛋白75 0.2ml

CSGLCAT 英文名称： 软骨素聚合酶3 0.2ml

Anti-CPSF4/CPSF30 剪切和多聚腺苷酸化特异性因子4Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Collagen VI alpha 1 英文名称： 抗Ⅵ型胶原 0.1ml

Anti-IL-13 白介素13Multi-class antibodies规格： 0.1ml

AHA(Human anti-Histone antibody) ELISA Kit 人抗组蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-IL-21 白介素21Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh LRSAM1 LRSAM1蛋白 规格 0.2ml

FABP(Human fatty acid-binding protein) ELISA Kit 人脂肪酸结合蛋白 96T

phospho-ROCK2(Tyr256) 英文名称： 磷酸化Rho相关蛋白激酶2 0.1ml