PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

苹果壳囊孢用途: 代谢产物

栗疫菌拉丁属名: Cryphonectria parasitica

霍乱弧菌拉丁属名: Vibrio cholerae

大秃马勃*拉丁属名: Calvatia gigantea

绳状篮状菌拉丁属名: Talaromyces funiculosus

长裙竹荪注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

嗜热脂肪地芽孢杆菌拉丁属名: Geobacillus stearothermophilus

杂色曲霉原变种拉丁属名: Aspergillus  versicolor var. versicolor

 米曲霉拉丁属名:  Aspergillus oryzae (Ahlburg) Cohn

野土地杆菌拉丁属名: Pedobacter agri

中濑掷孢酵母拉丁属名: Sporobolomyces nakasei

金黄壳囊孢菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

谷氨酸棒杆菌拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

大团囊虫草注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

蕈状芽孢杆菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
羽扇豆源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒供应商Aromatase 英文名称： 芳香化酶/细胞色素P450/雌激素合成酶 0.1ml

Anti-CCRK/FITC 荧光素标记细胞周期相关激酶IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

FE(Mouse ferritin) ELISA KIT 小鼠铁蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CD31/FITC 荧光素标记血小板内皮细胞黏附分子-1IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh DVL2 蓬乱蛋白2 规格 0.2ml

Rotavirus IgM 轮状病毒 IgM(间接法二步法)

MMP19 英文名称： 基质金属蛋白酶18/19 0.2ml

CDC4 英文名称： 抑制因子FBW7 0.2ml

Anti-MO25 alpha/CAB39 钙结合蛋白39Multi-class antibodies规格： 0.2ml

F X III (Human coagulation factor X III ) ELISA Kit 人凝血因子ⅩⅢMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-prox-1 prox-1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HDAC12 组蛋白去乙酰化酶12 规格 0.2ml

AQP-5 ELISA Kit 大鼠水通道蛋白5 96T

PAR-2 英文名称： 蛋白酶激活受体-2 0.1ml

Angiotensin II Type 1 Receptor 英文名称： 紧张素Ⅱ-1型受体 0.1ml

Anti-5-HTR1B /FITC 荧光素标记5-羟色胺受体1BIgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

IL-17 ELISA KIT 大鼠白介素17Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-AGEs/FITC 荧光素标记晚期糖基化终末产物IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FBXO38 F-box蛋白38 规格 0.2ml

Apo-H ELISA Kit 大鼠载脂蛋白H 96T

MGAT5 英文名称： 糖蛋白GNTVA 0.2ml

Cyclin E 英文名称： 周期素E 0.2ml

Anti-MOG 髓鞘少树突胶质细胞糖蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

HG(Human Herpes Gestation) ELISA Kit 人Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-AKT2 蛋白激酶B2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Headpin/SERPINB13 丝氨酸蛋白酶抑制剂13 规格 0.2ml

Alpha1-AGP(Human Alpha1-Acid glycoprotein) ELISA Kit 人α1酸性糖蛋白 96T

p47 英文名称： 血小板47蛋白 0.2ml