PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

土曲霉拉丁属名: Aspergillus terreus Thom

纳地青霉拉丁属名: Penicillium nalgiovense

冻干粉 产气荚膜梭菌计数注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

葡萄座腔菌属注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

粉状毕赤酵母拉丁属名: Pichia farinosa

Bacillus siamensis 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

pBluescript II拉丁属名: pBluescript II

产黄青霉拉丁属名: Penicillium chrysogenum

美澳型核果褐腐病菌拉丁属名: Monilinia fructicola

大肠埃希菌拉丁属名: coli

热带假丝酵母拉丁属名: Candida  tropicalis

黄隐球酵母拉丁属名: Cryptococcus flavus

哈茨木霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

柠檬两面神菌拉丁属名: Janibacter melonis
鳕鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒说明书小鼠丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(STK)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse serine/threonine protein kinase,STK ELISA Kit进口/原装

adiponectin(humen) 人脂联素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CK20 细胞角蛋白20Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NRP1/CD304 神经纤毛蛋白1 规格 0.1ml

processing solution 显影液试剂 200ml

TRF2 英文名称： 端粒结合蛋白2 0.1ml

C7orf10 英文名称： 7号染色体开放阅读框10 0.2ml

CDC27 英文名称： 后期促进复合蛋白3 0.1ml

Anti-Gelsolin 凝溶胶蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

sE-selectin(Human soluble E-selectin) ELISA Kit 人可溶性E选择素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-GDF8/MSTN 生长分化因子8Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Guinea pig IgG/FITC FITC标记的小鼠抗豚鼠IgG 规格 0.1ml

cTn- I (Human cardiac troponin I ) ELISA Kit 人心肌肌钙蛋白Ⅰ 96T

Phospho-RSK2(Tyr529) 英文名称： 磷酸化核糖体S6激酶RSK2 0.1ml

ATF6 英文名称： 活化转录因子6 0.1ml

Anti-Phospho-Na,K-ATPase alpha-1 (Tyr10) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化钠钾ATP酶蛋白a1IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

ADP(Mouse adiponectin) ELISA Kit 小鼠脂联素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CD117/FITC 荧光素标记CD117IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Donkey Anti-rabbit IgG/Cy5.5 Cy5.5标记的驴抗兔IgG 规格 0.1ml

Mouse serine/threonine protein kinase,STK ELISA Kit 小鼠丝酸/苏酸蛋白磷酸酶 96T

MIER2 英文名称： 中胚层诱导早期反应蛋白2 0.2ml

Cyclin C 英文名称： 周期素C 0.1ml

Anti-Nm23-H2 抑制基因Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Human Lyme IgG ELISA Kit 人莱姆IgGMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-Integrin beta 1/CD29 整合素β1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh LEF-1 淋巴增强因子-1 规格 0.1ml

TSH(Human Thyroid Stimulating Hormone) ELISA Kit 人促甲状腺素 96T

PACRG 英文名称： 麻疯病和共同调节蛋白 0.2ml