PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

大肠埃希氏菌拉丁属名: Escherichia coli

竹针孢座囊菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

*血红铆钉菇(又名松伞菌)拉丁属名: Chroogomphus rutilus

油桐盾壳霉用途: 植物病原物；用于该菌种群演化与流行学监测。

柔毛链霉菌拉丁属名: Streptomyces flocculus

尖孢镰刀菌用途: 代谢产物

秀珍菇注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

蜡状芽孢杆菌用途: 固氮

苏云金芽孢杆菌松蠋亚种注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

链霉素链霉菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus subtilis

胶孢镰孢拉丁属名: Fusarium subglutinans

苏云金芽孢杆菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

卵形巴贝斯虫（文县株）拉丁属名: ovata
兔源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒供应商DYRK1A 英文名称： 丝酸/苏酸蛋白激酶MNB 0.2ml

衔接蛋白β Anti-beta Adaptin/AP2 0.1ml

Anti-Gentamicin Monoclonal Antibody /Gold 胶体金离子标记小鼠抗庆大霉素单克隆IgGMulti-class antibodies规格： 0.5ml(35nm-40nm)

Rhesus antibody Rh phospho-ER-beta(ser87) 磷酸化雌激素受体β 规格 0.1ml

Defensin Beta2/beta-defensin 2/BD-2(rat) 防御素β2抗原(大鼠)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人PL12/抗丙氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)ELISA试剂盒 英文名称：Human anti-PL12-antibody,PL12/AlaRS ELISA Kit进口/分装

人PL7/抗苏氨酰tRNA合成酶(PL7)ELISA试剂盒 英文名称：Human anti-PL7-antibody ELISA Kit特价供应

CD96 英文名称： CD96 0.2ml

Anti-HPV 人类状瘤病毒Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Human SS-B/La Antibody ELISA Kit 人抗SS-B/LaMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-Integrin alpha 1/CD49a 整合素α1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Lipin 1 磷脂酸磷酸酯酶LPIN1 规格 0.2ml

HSV-Ag2(Human Herpes simplex virus 2) ELISA Kit 人单纯病毒抗原2 96T

RNF135 英文名称： 环指蛋白135 0.2ml

品名 规格 备注

Vesicle docking protein p115 英文名称： 囊泡对接蛋白p115 0.2ml

DAZL 英文名称： 细胞发育相关蛋白DAZL 0.2ml

Anti-APOH 载脂蛋白HMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Phospho-ELk1 (Ser383) 英文名称： 磷酸化细胞转录因子ELK1 0.1ml

固生蛋白 Anti-Tenascin 1ml

Anti-Tissue factor/CD142/CF3/F3/FITC 荧光素标记组织因子IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

CXCR4 英文名称： 细胞表面趋化因子受体4 0.1ml

Anti-IKK beta KB抑制蛋白激酶βMulti-class antibodies规格： 0.1ml

HABP(Human Hya]uronate binding protein) ELISA Kit 人透明质酸结合蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-HSP75/TRAP1 热休克蛋白-75Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MARCH9 膜相关环指蛋白9 规格 0.2ml

KLK 6(Human Kallikrein 6) ELISA Kit 人激肽释放酶6 96T

RCC2 英文名称： 染色体浓缩调节蛋白2 0.2ml