PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

硫氧化柠檬胞菌拉丁属名: Citreicella thiooxidans

红色盐几何形菌拉丁属名: Halogeometricum  rufum

布氏乳杆菌拉丁属名: Lactobacillus  buchneri

枇杷假尾孢注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

平菇用途: 食用菌

枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus subtilis

模拟乳粉霉菌酵母菌质控样品(定量)拉丁属名: 模拟乳粉霉菌酵母菌质控样品(定量)

黄色粘球菌*拉丁属名: Myxococcus xanthus

枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus subtilis

猪丝菌拉丁属名: rhuriopathiae

短波单胞菌拉丁属名: Brevundimonas sp.

鞘氨单胞菌属拉丁属名: Sphingomonas  sp.

漏斗多孔菌拉丁属名: Polyporus arcularius

热噬淀粉芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus  thermoamylovorans

好热地芽孢杆菌拉丁属名: Geobacillus kaustophilus
牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒规格ACTR 英文名称： 丝酸/苏酸蛋白激酶ATR 0.1ml

Anti-ATP-sensitive K+ channel subunit Kir6.2/FITC 荧光素标记ATP敏感性钾通道亚基kir6.2IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

(Mouse anti-IgE receptor antibody) ELISA Kit 小鼠抗IgE受体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CD80/B7-1/FITC 荧光素标记刺激分子B7-1蛋白IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh DPCR1 DPCR1蛋白 规格 0.2ml

CA153 癌相关抗原 96T

MICA 英文名称： MHC I类链相关蛋白A/组织相容性复合物MHCIa 0.1ml

CD8 英文名称： CD8/CD8-β 0.1ml

Anti-Gax 生长终止特异性同源盒基因Multi-class antibodies规格： 0.2ml

PT(Human Prothrombin0 ELISA Kit 人凝血酶原Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-PRAS40 (Thr246) 磷酸化蛋白激酶AKT底物1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HDL/high density lipoprotein 规格 0.1ml

C3(Mouse Complement 3) ELISA Kit 小鼠补体蛋白3 96T

p75 NGF Receptor 英文名称： 神经生长因子受体 0.1ml

人L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒英文名称：Human L-Selectin ELISA Kit 特价供应

BCRP/ABCG2(breast cancer resistance protein) 癌耐药相关蛋白(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-c-Abl 非受体酪氨酸激酶c-AblMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-CHEK1(Ser317) 磷酸化细胞周期检测点激酶1 规格 0.1ml

兔抗Biotin (生物素)血清 0.5ml 国产

WDR16 英文名称： WD重复蛋白16 0.2ml

Phospho-Dab1 (Ser491) 英文名称： 磷酸化Disabled 1 0.1ml

CWF19L1 英文名称： CWF19L1蛋白 0.2ml

Anti-Integrin beta 5 整合素β5Multi-class antibodies规格： 0.1ml

P-gp(Human permeability glycoprotein) ELISA Kit 人P糖蛋白/渗透性糖蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Hck 造血细胞激酶Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MIP2/GRO Beta/CXCL2 巨噬细胞蛋白2( GROβ) 规格 0.1ml

CKMB(Human cytokinin MB) ELISA Kit 人激动异构酶/细胞分裂素MB 96T

RNFB 英文名称： E3泛素蛋白连接酶B/环指蛋白B 0.2ml