PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

Sinomonas拉丁属名: Sinomonas  susongensis sp. nov.

慢生根瘤菌拉丁属名: Bradyrhizobium sp.    

黄青霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

副球菌拉丁属名: Paracoccus sp.

大肠埃希氏菌拉丁属名: Escherichia  coli

香菇用途: 栽培

假单胞菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大毛霉拉丁属名: Mucor mucedo (Linnaeus) Fresenius

网孢麻孢菌拉丁属名: Gelasinospora reticulata

橙盖伞注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

中国油脂酵母拉丁属名: Lipomyces chinensis

酿酒酵母拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

淡紫拟青霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

葡萄座腔菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

卵孢白僵菌用途: 生物防治
猫源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒规格CHCHD8 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白CHCHD8 0.2ml

Anti-CD71/TFR 转铁蛋白受体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

CD147/EMMPRIN(Extracellular matrix metalloproteinase inducer) CD147(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CCL12/MCP5 单核细胞趋化蛋白5Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PCDHA2 原钙粘附蛋白α2 规格 0.2ml

CD3D Kit Human 人 CD3d / CD3 delta ELISA配对 ELISA

TM7SF2 英文名称： 脱氢胆固醇还原酶14 0.2ml

CD68 英文名称： CD68 0.1ml

Anti-NFKB p65 细胞核因子/k基因结合核因子Multi-class antibodies规格： 0.1ml

EMP(Human erythrocyte membrane protein) ELISA Kit 人红细胞膜蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Parvalbumin 细小清蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HAUSP/USP7 病毒相关泛素特异性蛋白酶7 规格 0.2ml

FRA(Human fibronection related antigen) ELISA Kit 人纤维连接素相关抗原 96T

Phospho-PDPK1(Ser393) 英文名称： 磷酸化3磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-CREB-1(Ser121) 磷酸化CREB-1 规格 0.1ml

流式用破膜剂 50T Invitrogen原装

ZIC3 英文名称： 内脏异位相关蛋白/锌指蛋白203 0.2ml

DUSP6 英文名称： 双特异性蛋白磷酸酶6/原活化蛋白激酶磷酸酶3 0.2ml

SERPINF2 SerpinF2 鼠单抗 (FITC) Human

Ep300 英文名称： CREB结合蛋白p300 0.1ml

早老素蛋白-1 Anti-PS-1 0.2ml

Cullin 英文名称： CULLIN 0.2ml

Anti-Nadrin DysbindinMulti-class antibodies规格： 0.2ml

UPAR 大鼠尿激酶样纤溶酶原活化物受体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Dynamin 2 酶动力蛋白2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NAP1L1 核小体组装蛋白1 规格 0.2ml

Human terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 ELISA Kit 人末端补体复合物C5b-9 96T

SIRT6 英文名称： 沉默调节相关蛋白6 0.2ml