PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

奇异翅孢壳拉丁属名: Emericellopsis mirabilis

异常汉逊酵母拉丁属名: Hansenula  anomala

健康兔血清规格: 0.5ml

胶孢注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

叶际类芽孢杆菌拉丁属名: Paenibacillus phyllosphaerae

氮还原类芽胞杆菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大毛霉拉丁属名: Mucor mucedo

头葡萄球菌拉丁属名: Staphylococcus capitis

链霉菌用途: 代谢产物具有抗菌活性。

短小芽胞杆菌拉丁属名: Bacillus  pumilus

阿萨希丝孢酵母拉丁属名: Trichosporon  asahii

葡萄糖杆菌属拉丁属名: Gluconobacter cerinus

小笠原德克斯酵母拉丁属名: Derxomyces boninensis

米根霉拉丁属名: Rhizopus  oryzae

芬氏纤维微菌拉丁属名: Cellulosimicrobium funkei
开心果源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Anti-CEA 癌胚抗原单克隆(检测)Multi-class antibodies规格： 0.1ml

小鼠热休克蛋白70(HSP-70)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Heat Shock Protein 70,Hsp-70 ELISA Kit特价供应

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小鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Heat Shock Protein glycoprotein 96,HSP gp96 ELISA Kit特价供应

小鼠热休克因子1(HSF1)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Heat Shock Factor 1,HSF1 ELISA Kit特价促销

小鼠绒毛膜激素(CG)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Chorionic Gonadotrophin,CG ELISA Kit特价供应

PP2Ac 蛋白磷酸酶4(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

CD5L 英文名称： CD5L 0.2ml

Anti-DRP3 Dystrobrevin α蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Calcitonin 大鼠降钙素Multi-class antibodies规格： 48T

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Rhesus antibody Rh NCF/NCF4/p40phox 嗜中性粒细胞胞浆因子4 规格 0.1ml

Human plasmin-antiplasmin complex,PAP ELISA Kit 人纤溶酶抗纤溶酶复合物 96T

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小鼠可溶性CD30(sCD30)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse soluble cluster of differentiation 30,sCD30 ELISA Kit进口/原装

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Connexin-43(Cx43) 间隙连接蛋白43(多肽片断抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

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Anti-Phospho-FLT3 (Tyr589/591) 磷酸化FMS样酪氨酸激酶3Multi-class antibodies规格： 0.1ml

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Anti-Fc gamma RII a/CD32a 免疫球蛋白G Fc段受体ⅡMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的小鼠抗大鼠IgG 规格 0.1ml

OJ/IleRS(Human anti-OJ-antibody) ELISA Kit 人OJ/抗异亮酰tRNA合成酶 96T

phospho-SLP76 (Tyr145) 英文名称： 磷酸化淋巴细胞胞浆蛋白2 0.1ml