PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

日光盐场喜盐芽孢杆菌拉丁属名: Halobacillus yeomjeoni

赖氏毛壳拉丁属名: Chaetomium raii

黑曲霉拉丁属名: Aspergillus  niger

大肠杆菌拉丁属名: Escherichia coli

*酸热脂环酸芽胞杆菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

分枝节杆菌拉丁属名: Arthrobacter ramosus

米兰链霉菌拉丁属名: Streptomyces mediolani

粉红单端孢注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

胶韧革菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

假诺卡氏属拉丁属名: Pseudonocardia aurantiaca

布鲁氏菌 生物Ⅱ型拉丁属名: abortus BiovarⅡ

酿酒酵母拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

韩国灵芝注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

地衣芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus  licheniformis

芽胞杆菌用途: 在无机盐培养基中以50mg/l的吡虫啉为碳源培养，6天内吡虫啉降解率30%左右
火鸡源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Rhesus antibody Rh Phospho-CRMP2 (Thr514) 磷酸化二氢嘧啶酶样2 规格 0.1ml

考马斯亮蓝G-250溶液 100ml/500ml 自产

ZFP219 英文名称： 锌指蛋白219 0.2ml

DLC1 英文名称： 胞浆动力蛋白轻链1 0.2ml

PRDX6 Peroxiredoxin 6 / PRDX6 鼠单抗 (FITC) Human

E2F4 英文名称： 转录因子E2F-4 0.1ml

转移生长因子–β2 Anti-TGF-β2 0.1ml

CD56 英文名称： 神经细胞粘附分子1 0.1ml

Anti-Phospho-MK1/2 (Ser221) 磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Human coagulation factor VIII related antigen,F VIII -Ag ELISA Kit 人凝血因子Ⅷ相关抗原Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-RNF148 环指蛋白148Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh GSTO1 谷胱甘肽硫转移酶ω1 规格 0.1ml

SP-A(Human Surfactant Protein A) ELISA Kit 人表面活性蛋白A 96T

SHANK3 英文名称： 富含脯酸突触相关蛋白SHANK3 0.2ml

ABAT 英文名称： γ基丁酸转酶 0.1ml

Anti-CD244/NKR2B4/SLAMF4/FITC 荧光素标记CD244IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

BF(Mouse factor B) ELISA Kit 小鼠B因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CD4/PE 荧光素PE标记CD4IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh EAAT3 胶质细胞谷氨酸运载蛋白3(神经/上皮细胞谷氨酸运载蛋白) 规格 0.1ml

Beta-HCG 人绒毛膜激素(夹心法一/二步法) 96T

MT-ND1 英文名称： NADH复合体1 0.2ml

CTR9 英文名称： 血小板活化因子CTR9 0.2ml

Anti-MASP 甘露聚糖结合凝集素丝氨酸肽酶1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Pim1(Human proviral integration site 1) ELISA Kit 人前病毒整合位点1Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-IRF3 干扰素调节因子3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh LHX6 转录因子LHX6 规格 0.2ml

TUBB(Human Beta-tubulin) ELISA kit 人β-微管蛋白 96T

PCK1 英文名称： 磷酸烯醇酸羧激酶 0.2ml