PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

猴头菇注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

双色牛肝菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

长双歧杆菌*亚种拉丁属名: Bifidobacterium longum subsp. infantis

大肠埃希氏菌拉丁属名: Escherichia  coli

拟茎点霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

北见微杆菌拉丁属名: Microbacterium kitamiense

球毛壳菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

栗疫菌拉丁属名: Cryphonectria parasitica

细极链格孢注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

胡椒树青霉拉丁属名: Penicillium molle

红霉素拟无枝酸菌用途: 益生菌

桑叶刺盘孢拉丁属名: Colletotrichum morifolium Hara

金黄壳囊孢菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

嗜热嗜脂肪地芽孢杆菌拉丁属名: Geobacillus stearothermophilus

微黄八叠球菌拉丁属名: Sarcina subflava Ravenel
虎源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒供应商ALF 英文名称： 通用转录因子IIA样因子 0.1ml

Anti-APP695/770 /FITC 荧光素标记淀粉样肽前体蛋白IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

ATGA/TGAB ELISA Kit 大鼠抗甲状腺球蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Acetyl CoA Carboxylase/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠、猴、乙酰辅酶A羧化酶IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FIBCD1 含纤维蛋白原C结构域蛋白1 规格 0.2ml

NGF- Beta(Human Nerve growth factor- Beta) ELISA kit 人的神经生长因子-β 96T

Mtp53(N235K N239Y) 英文名称： 突变型P53 0.1ml

CD5 英文名称： CD5 0.1ml

Anti-MCSF Receptor 巨噬细胞集落刺激因子受体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

MBP/MBL(Human Mannma binding protein/mannan binding lectin) ELISA Kit 人甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-P-selectin/CD62p P选择素Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh HCCR2/LETMD1 原癌基因2 规格 0.2ml

GGT(Human gamma glutamyl transpeptidase) ELISA Kit 人γ谷酰转移酶 96T

PCNA 英文名称： 增殖细胞核抗原 0.1ml

AVPR2 英文名称： 精酸加压素受体2 0.1ml

Anti-Acinus L/S/FITC 荧光素标记腺泡Acinus L/SIgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

C I CP(Mouse cross-linked C-telopeptides of Type I collagen) ELISA Kit 小鼠Ⅰ型前胶原C末端肽Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CA125/Biotin 生物素标记兔抗人CA125抗原IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh DRAK2 DAP凋亡诱导蛋白激酶2 规格 0.2ml

HSV- II IgG 单纯Ⅱ型病毒 IgG(间接法二步法)

MTNR1B 英文名称： 褪黑素受体1B 0.1ml

CTLA4 英文名称： 细胞毒性T细胞抗原-4 0.2ml

Anti-Protein A 重组蛋白AMulti-class antibodies规格： 0.2ml

LEP(Human Leptin) ELISA kit 人瘦素Multi-class antibodies规格： 48T

anti-Integrin alpha E2 整合素alpha E2 Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Kif14 protein 驱动蛋白家族Member14蛋白 规格 0.2ml

CP(Human cicatricial Pemphigoid) ELISA Kit 人性天疱疮 96T

PCMT1 英文名称： 天门冬酸甲基转移酶PCMT 0.2ml