PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

ATCC 34877拉丁属名: Cryptococcus neoformans

毛霉属拉丁属名: Mucor  sp.

卷枝毛霉卷枝变型拉丁属名: Mucor circinelloides f. circinelloides

原玻璃蝇谷氨酸杆菌拉丁属名: Glutamicibacter protophormiae

短波单胞菌属拉丁属名: Brevundimonas  staleyi

沼泽粘液杆菌拉丁属名: Mucilaginibacter  paludis

尖孢镰孢拉丁属名: Fusarium oxysporum

根际考克氏菌拉丁属名: Kocuria rhizophila

高山腐霉拉丁属名: Pythium takayamanum

芽胞杆菌用途: 分类、研究，具有 生物肥料潜力。

链孢囊菌用途: 代谢产物具有抗菌活性。

大豆慢生根瘤菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

滑菇注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑曲霉拉丁属名: Aspergillus  niger

豌豆根瘤菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
猴源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒供应商S100 Protein 1:300 浓缩液 0.1ml 进口分装

UBE2E3 英文名称： 泛素蛋白连接酶E3 0.2ml

DHPS 英文名称： 脱氧辅合酶蛋白 0.2ml

Anti-phospho-ATF2(Thr69/71) 磷酸化活化复制因子2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

phospho-Ephrin B (Ser300) 英文名称： 磷酸化Ephrin B 0.1ml

微管相关蛋白 Anti-Tau protein 0.1ml

Anti-TIF1 beta/KAP1/FITC 荧光素标记转录中介因子Tif1βIgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

CD45 英文名称： 白细胞共同抗原 0.1ml

Anti-Phospho-PKA C (Thr197) 磷酸化蛋白激酶C亚性Multi-class antibodies规格： 0.1ml

PPIL1(Human peptidylprolyl isomerase(cyclophilin)-like 1) ELISA Kit 人肽酰脯氨酰异构酶(亲环蛋白)样1Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-SM Myosin (Smooth Muscle) 人心肌肌凝蛋白(平滑肌) 小鼠单抗Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh ILP2 抑制细胞凋亡样蛋白2 规格 0.2ml

ssDNA(human single stranded DNA Antibody) ELISA Kit 人抗单链DNA/变性DNA 96T

PP2A alpha + beta 英文名称： 蛋白质磷酸酶-2A 0.1ml

C6orf97 英文名称： 6号染色体开放阅读框97 0.2ml

Anti-CK2 细胞角蛋白2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Human visfatin 人内脏脂肪素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-CIDEB 促进凋亡基因Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NUBP1 核苷酸结合蛋白1 规格 0.2ml

RNAin RNAin(非冻型RNA样品保存液) 10ml

TOP1MT 英文名称： 线粒体DNA拓普西异构酶Ⅰ 0.1ml

CtIP 英文名称： 视网膜母细胞瘤结合蛋白8 0.2ml

Anti-PDK1/PDPK1 3磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

8-iso-PG(Human 8-iso prostaglandin) ELISA Kit 人8异素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-LHR/CGR 促黄体生成素受体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh KLK4 激肽释放酶4 规格 0.1ml

PDGF-AB ELISA Kit 大鼠血小板衍生生长因子AB 96T

Phospho-PRK1(Thr774) + PRK2 (Thr816) 英文名称： 磷酸化腺衍生内皮生长因子 0.1ml