PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

孟氏假单胞菌拉丁属名: Pseudomonas  mandelii

绿粘帚霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑曲霉拉丁属名: Aspergillus niger van Tieghem

短波单胞菌拉丁属名: Brevundimonas sp.

地衣芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus licheniformis

土壤成对杆菌拉丁属名: Dyadobacter soil

枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus subtilis

冷杆菌属拉丁属名: Cryobacterium  luteum

葡萄座腔菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

玉米大斑拉丁属名: Setosphaeria turcica

鲍鱼侧耳注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

农药残留速测仪（农卡专用）规格: 套 微型 6通道

香菇拉丁属名: Lentinula  edodes

腐皮镰孢拉丁属名: Fusarium solani

丁香暗黄链霉菌拉丁属名: Streptomyces lilacinofulvus
含麸质谷物源性探针法荧光定量PCR试剂盒供应商CT13 英文名称： /抗原13 0.2ml

Anti-CGP-39/YKL-40 软骨糖蛋白39Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Caspase-6 人Caspase-6Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-DCN/Decorin 核心蛋白聚糖Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Nestin 巢蛋白/神经上皮干细胞蛋白 规格 0.1ml

Human Thymosin ELISA Kit 人胸腺肽 96T

TIE2 英文名称： 生成素受体2 0.1ml

CD44v7 英文名称： CD44V7 0.1ml

Anti-NCOA2/KAT13C 核受体辅助激活蛋白2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Human decay-accelerating factor,DAF ELISA Kit 人降解加速因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Smac/DIABLO 线粒体促凋亡蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Goat anti-rat IgG whole serum 羊抗大鼠IgG抗血清 规格 1ml

MK(Human Midkine) ELISA Kit 人中期因子 96T

phospho-p95 NBS1 (Ser343) 英文名称： 磷酸化DNA修复蛋白NBS1 0.1ml

Human Insulin Receptor Beta,ISR- Beta ELISA KIT 人受体β 96T

TSLC1 英文名称： 细胞粘附分子1 0.1ml

COLEC12 英文名称： 凝集胎盘蛋白1 0.2ml

Anti-DRD4 多巴胺受体D4Multi-class antibodies规格： 0.2ml

豚鼠白三烯B4(LTB4)ELISA试剂盒 英文名称：guinea pig Leukotriene B4,LT-B4 ELISA Kit 进口/分装

豚鼠白三烯D4(LTD4)ELISA试剂盒 英文名称：Guinea pig leukotriene D4,LT-D4 ELISA Kit 特价供应

豚鼠表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒 英文名称：Guinea pig Epidermal growth factor,EGF ELISA Kit 特价供应

CTDSPL2 英文名称： CTDSPL2蛋白 0.2ml

Anti-CD86/B7-2 CD86Multi-class antibodies规格： 0.1ml

BIRC5/Survivin variant 细胞凋亡抑制因子4(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-CD83/HB15 CD83Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh OVA/SerpinB8 鸡卵白蛋白/卵清蛋白 规格 0.1ml

CST2 Kit Human 人 Cystatin SA / CST2 ELISA配对 ELISA

Phospho-TSC2(Ser1418) 英文名称： 磷酸化性硬化蛋白 0.1ml