PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

恶臭假单胞菌用途: 分类、研究，具有处理养殖废水潜力。

灰绿链霉菌拉丁属名: Streptomyces griseoviridis

枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus subtilis

近平滑假丝酵母注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

链霉菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

苏云金芽胞杆菌用途: 科研研究

鸡伤寒沙门氏菌拉丁属名: gallinarum

酿酒酵母拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

杉叶散斑壳(都不提供）拉丁属名: Lophodermium uncinatum Darker

间型假丝酵母拉丁属名: Candida intermedia

突尼斯叶杆菌拉丁属名: Phyllobacterium  ifriqiyense

大豆慢生根瘤菌用途: 与大豆共生固氮,培养基pH4.3生长

康宁木霉拉丁属名: Trichoderma  koningii

链霉菌用途: 产抗菌素

彩色豆马勃注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
柑橘黄龙病菌亚洲种探针法荧光定量PCR试剂盒 人多肽YY(Peptide-YY)ELISA试剂盒英文名称：Human Peptide YY ELISA Kit特价供应

人多效生长因子(PTN)ELISA试剂盒英文名称：Human pleiotrophin，PTN ELISA Kit特价供应

人多形核白细胞弹性蛋白酶(PMN Elastase)ELISA试剂盒英文名称：Human Polymorphonuclear Elastase,PMN Elastase ELISA Kit进口/原装

人多药耐药相关蛋白(MRP)ELISA试剂盒英文名称：Human multidrug resistance-associated protein,MRP ELISA Kit 进口/分装

人儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒英文名称：Human catecholamine，CA ELISA Kit特价供应

Matriptase 蛋白裂解酶(一种新的癌基因)抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-AMPK alpha 2 腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

CD39 英文名称： CD39 0.2ml

Anti-Phospho-Histone H3 (Ser28) 磷酸化组蛋白3Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Beta2-GP1 IgA/G/M(Human Beta2-glycoprotein 1 antibody IgA/G/M) ELISA Kit 人β2糖蛋白1IgA/G/MMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-rInsulin monoclonal (pig) 抗单克隆(猪)Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh LMO2 T淋巴细胞易位蛋白2 规格 0.2ml

CysLTs(Human cysteinyl leukotrienes) ELISA Kit 人半胱酰白三烯 96T

REA 英文名称： B淋巴细胞受体相关蛋白 0.2ml

大鼠干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA试剂盒英文名称：Rat interferon-inducible protein 10,IP-10 ELISA Kit特价供应

大鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)ELISA试剂盒英文名称：Rat Stem cell factor/mast cell growth factor,SCF/MGF ELISA Kit特价促销

大鼠干细胞因子受体(SCFR)ELISA试剂盒英文名称：Rat Stem Cell Factor Receptor,SCFR ELISA Kit进口/分装

FGF5 peptide 纤维母细胞生长因子5抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

B Raf Anti-B Raf 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-DVL2(Thr224) 磷酸化蓬乱蛋白2 规格 0.1ml

纤维素膜(30cm×3m 0.45um) 1卷 Pall-Gelman

CSTP1 英文名称： 钙调神经磷酸酶CSTP1 0.2ml

Anti-FSH receptor 促卵泡刺激素受体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

HLA-G 大鼠白细胞抗原GMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-Dysferlin Dysferlin蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NANOS2 细胞增殖相关蛋白NANOS2 规格 0.2ml

Human thrombospondin 1,TSP-1 ELISA Kit 人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1 96T

SMYD2 英文名称： 组蛋白甲基转移酶SMYD2 0.2ml