PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

热带假丝酵母拉丁属名: Candida  tropicalis

大肠埃希氏菌拉丁属名: Escherichia coli

枯草芽孢杆菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

克雷伯氏菌亚种拉丁属名: Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae

肉糜  马源性成分（定性）拉丁属名: 肉糜  马源性成分（定性）

中国汉纳酵母乳酸变种拉丁属名: Hannaella sinensis var. lactis

枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus subtilis

特异腐质霉拉丁属名: Humicola insolens

大肠埃希氏菌拉丁属名: Escherichia coli

曲霉拉丁属名: Aspergillus sp.

Thielavia 拉丁属名: Thielavia

泗川类芽孢杆菌拉丁属名: Paenibacillus sacheonensis

壁芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus muralis

蜡蚧菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

蜡样芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus  cereus
耶尔森菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒供应商Rhesus antibody Rh phospho-MAPKAPK5(Ser93) 磷酸化p38调节/激活蛋白激酶 规格 0.1ml

ASPP2(apoptosis stimulating protein of P53 2) P53凋亡刺激蛋白2抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人素A2(TX-A2)ELISA试剂盒 英文名称：Human Thromboxane A2,TX-A2 ELISA Kit进口/原装

人素B2(TXB2)ELISA试剂盒英文名称：Human Thromboxane B2，TX-B2 ELISA Kit进口/分装

人调节蛋白(TM)ELISA试剂盒英文名称：Human thrombomodulin，TM ELISA Kit 特价促销

人血吸虫(schistosoma)ELISA试剂盒英文名称：human schistosoma ELISA Kit特价促销

人血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒英文名称：Human Fibrinogen,Fbg ELISA Kit特价促销

CD35 英文名称： Ⅰ型补体受体(C3b/C4b受体) 0.1ml

Anti-MMP-9 基质金属蛋白酶-9Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Casp-12(Human Caspase 12) ELISA Kit 人胱天蛋白酶12Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Nox1/NADPH oxidase 1 有丝分裂氧化酶1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IL-9 白介素9 规格 0.1ml

PR3 Ab-IgG(Human Anti-proteinase 3 antibody IgG) ELISA Kit 人抗蛋白酶3IgG 96T

PLGF 英文名称： 胎盘生长因子 0.1ml

Desmoglein 1 英文名称： 桥粒芯糖蛋白1 0.1ml

PVR CD155 / PVR 鼠单抗 (PE) Human

EFHA1 英文名称： EFHA1蛋白 0.1ml

RhoA Anti-RhoA 0.1ml

Anti-TACR3/NK-3 receptor /FITC 荧光素标记速激肽受体3IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MK2(Thr394) 磷酸化原活化蛋白激酶激酶2 规格 0.1ml

Apelin 脂肪因子Apelin抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

CSPP1 英文名称： 中心体和纺锤体极相关蛋白1 0.1ml

Anti-FGF3/Oncogene INT2 纤维母细胞生长因子3Multi-class antibodies规格： 0.1ml

EGFR 小鼠表皮生长因子受体Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-ATEXPA10 植物延长蛋白(拟南芥)Multi-class antibodies规格： 1ml

Rhesus antibody Rh MRP5/ABCC5 多药耐药相关蛋白5 规格 0.1ml

anti-CMV IgM(Human anti-cytomegalovirus IgM antibody) ELISA Kit 人抗巨细胞病毒IgM 96T

Sclerostin 英文名称： 骨形态发生抑制蛋白SOST 0.2ml