PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

苏云金芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus thuringiensis Berliner

大肠埃希氏杆菌拉丁属名: Escherichia  coli

根瘤菌用途: 与小冠花共生固氮，1983年开始在陕西应用

矩圆黑盘孢注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

宛氏拟青霉拉丁属名: Paecilomyces variotii

壁芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus muralis

黄绿木霉拉丁属名: Trichoderma aureoviride

球黑孢霉拉丁属名: Nigrospora sphaerica

乳酒假丝酵母拉丁属名: Candida  kefyr

谷氨酸棒杆菌拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

热灰链霉菌拉丁属名: Streptomyces thermogriseus

果生链核盘菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

五原假黄单胞菌拉丁属名: Pseudoxanthomonas wuyuanensis

运动替斯崔纳菌拉丁属名: Tistrella mobilis
假结核耶尔森菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格Emp1 (epithelial membrane protein 1) 表皮膜蛋白1抗原Multi-class antibodies规格： 0.5ml

钙离子ATP酶通道蛋白 Anti-ATP2c1/Ca++ ATPase 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-EGFR(Ser991) 磷酸化表皮生长因子受体 规格 0.1ml

D-Hanks缓冲液(HBSS) 250ml 国产

ZNF217 英文名称： 锌指蛋白217 0.2ml

DLX4 英文名称： DLX4 0.2ml

钙离子ATP酶通道蛋白 Anti-ATP2c1/Ca++ ATPase 0.1ml

CD34 英文名称： CD34 0.1ml

Anti-Phospho-EphA2 (Tyr594) 磷酸化酪氨酸蛋白激酶A2受体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

IL-15 小鼠白介素-15Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-MK1/2 (Ser217/221) 磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MTM1/Myotubularin 肌微管素1 规格 0.2ml

A Beta1-42(Human amyloid beta peptide 1-42) ELISA Kit 人β淀粉样蛋白1-42 96T

SLC34A2 英文名称： 磷酸钠协同转运蛋白 0.1ml

蓖麻凝集素(RCA)ELISA试剂盒 英文名称：Ricinus communis agglutinin,RCA ELISA Kit特价促销

扁豆凝集素(LCA)ELISA试剂盒 英文名称：Lens culinaris agglutinin,LCA ELISA Kit进口/原装

菜豆凝集素(PHA)ELISA试剂盒 英文名称：Phaseolus vulgaris agglutinin,PHA ELISA Kit进口/分装

Cav-1 ELISA Kit 大鼠窖蛋白Caveolin1Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Aurora B/FITC 荧光素标记极光激酶BIgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh EXTL 外生性骨疣样蛋白2 规格 0.2ml

L-LDH ELISA Kit 大鼠L-鼠乳酸脱氢酶 96T

CSNK1D 英文名称： 酪蛋白激酶δ1 0.2ml

Anti-ER-Beta 雌激素受体βMulti-class antibodies规格： 0.1ml

EPO 小鼠促红细胞生成素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-FGFR3/CD333 成纤维细胞生长因子受体3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Rabbit IgM/Cy3 Cy3标记的小鼠抗兔IgM 规格 0.1ml

ATF-1(Human activating transcription factor-1) ELISA Kit 人转录因子-1 96T

STK33 英文名称： 丝酸/苏酸激酶33 0.2ml