PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

褐球固氮菌拉丁属名: Azotobacter  chroococcum

蓝色犁头霉拉丁属名: Absidia caerulea

苹果双壳菌*注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽胞杆菌拉丁属名: Bacillus  subtilis

火木层孔菌拉丁属名: Phellinus igniarius

暗色拟茎点霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

美澳型核果褐腐病菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

巨型艾美耳球虫拉丁属名: maxima

枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus  subtilis

黄硬皮马勃注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

土曲霉拉丁属名: Aspergillus terreus

泥生刺囊壳拉丁属名: Ascotricha sedimenticola

光帽鳞伞(滑菇)拉丁属名: Pholiota nameko

黑曲霉拉丁属名: Aspergillus niger

绿针假单胞菌拉丁属名: Pseudomonas chlororaphis
酵母菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Rhesus antibody Rh PDCD6/ALG2 凋亡相关蛋白6 规格 0.2ml

MICB Kit Human 人 MICB / MIC-B ELISA配对 ELISA

Transportin 1 英文名称： 转运蛋白1 0.2ml

C4 binding protein 英文名称： 补体4结合蛋白 0.2ml

Anti-CA I 碳酸酐酶1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

小鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA试剂盒英文名称：Mouse nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH ELISA Kit 特价供应

小鼠氧化(OLAb)ELISA试剂盒英文名称：Mouse oxidized lowdensity lipoprotein antibody,OLAb ELISA Kit特价促销

CD33 英文名称： CD33 0.2ml

Anti-IL-22 白介素-22Multi-class antibodies规格： 0.2ml

MOG ELISA Kit (human) 抗髓鞘少树突胶质细胞糖蛋白(人)Multi-class antibodies规格： 96T

Anti-IL-21R 白介素21受体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh LRRTM1 富含亮氨酸重复跨膜神经元蛋白1 规格 0.2ml

BMP-6(Human Bone Morphogenetic Protein 6) ELISA Kit 人骨形成蛋白6 96T

phospho-ROCK2(Thr249) 英文名称： 磷酸化Rho相关蛋白激酶2 0.1ml

脑钠素/利钠肽 Anti-BNP 0.1ml

ERCC6L 英文名称： 发育相关蛋白ERCC6L(乙醇致畸因子) 0.2ml

一种抑制基因 Anti-PTEN/MMAC1 0.1ml

Anti- Alpha-Synuclein/FITC 荧光素标记核突触蛋白-αIgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Met(Tyr1234/1235) 磷酸化肝细胞生长因子受体(原癌基因) 规格 0.1ml

HIV gp120 病毒(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

大鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA试剂盒英文名称：Rat Caspase 3,Casp-3 ELISA Kit特价促销

CSMD3 英文名称： CSMD3蛋白 0.2ml

Anti-Follistatin 卵泡抑素Multi-class antibodies规格： 0.2ml

TGF Beta2(Human transforming growth factors Beta2) ELISA Kit 人转化生长因子β2Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-FSP/Spastin 纤维母细胞表面蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/AP 碱性磷酸酶(AP)标记的小鼠抗人IgM 规格 0.1ml

IRAP(Human ICE protease-activating factor) ELISA Kit 人ICE蛋白酶激活因子 96T

SLITRK5 英文名称： 神经突触相关蛋白SLITRK5 0.2ml