PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

酿酒酵母拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

Mesorhizobium拉丁属名: Mesorhizobium  sediminum sp. nov.

中间柠檬酸杆菌拉丁属名: Citrobacter  intermedias

密丛毛霉拉丁属名: Mucor plumbeus

巴氏葡萄球菌拉丁属名: Staphylococcus pasteuri

米根霉拉丁属名: Rhizopus oryzae

芋枝孢注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

耐久肠球菌拉丁属名: Enterococcus  durans

灵芝注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus subtilis

Bacillus atrophaeus注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

细极链格孢注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

Chrysonilia sitophila注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

海海芽孢杆菌拉丁属名: Marinibacillus marinus

竹喙球菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
沃尔巴克氏菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒 人绒毛膜激素(HCG)ELISA试剂盒英文名称：Human Chorionic Gonadotrophin，HCG ELISA Kit进口/分装

phospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) peptide 磷酸化原活化蛋白激酶p38抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-MASH1 神经母细胞特异性转移因子Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-AQP2(Ser269) 磷酸化水通道蛋白2 规格 0.1ml

Tgase 浓缩液 0.1ml 进口分装

UEVLD 英文名称： 泛素结合酶E2样蛋白 0.2ml

DIRC2 英文名称： 干扰蛋白2 0.2ml

CD2BP3 英文名称： CD2结合蛋白3 0.2ml

Anti-lamin A 核纤层蛋白AMulti-class antibodies规格： 0.2ml

HAase(Human Hyaluronidase) ELISA Kit 人透明质酸酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-NF-M 中分子量神经丝蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh IL-17RB 白介素-17B受体 规格 0.1ml

IL-5 ELISA Kit 大鼠白介素5 96T

Profilin 1 英文名称： 前纤维蛋白1 0.1ml

HA Kit Influenza 甲型 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) ELISA配对 ELISA

TRPM3 英文名称： 瞬时受体电位离子通道蛋白3(M亚家族) 0.2ml

CYP11B2 英文名称： 醛固酮合成酶CYP11B2 0.2ml

Anti-cdc25A 细胞分裂周期蛋白25Multi-class antibodies规格： 0.2ml

小鼠催产素(OT)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse oxytocin,OT ELISA Kit进口/分装

小鼠催乳素(PRL)ELISA试剂盒英文名称：mouse prolactin,PRL ELISA Kit特价促销

小鼠大内皮素(Big ET)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Big Endothelin,Big ET ELISA Kit进口/分装

CSF3 英文名称： 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子3 0.1ml

anti-Cathepsin L 组织蛋白酶LMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Akt/PKC(Protein Kinase C,PKC) 蛋白激酶C(多肽抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Phospho-Beta-Catenin (Ser675) 磷酸化β 连环素蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh PCDHGA9 原钙粘蛋白γA9 规格 0.2ml

RBP4 Kit Human 人 RBP4 / PRBP ELISA配对 ELISA

phospho-Tau protein(Ser519) 英文名称： 磷酸化微管相关蛋白 0.1ml