PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

狭窄刺革菌拉丁属名: Hymenochaete attenuata

耐盐枝孢拉丁属名: Cladosporium halotolerans

巨枝膝梗孢拉丁属名: Gonytrichum macrocladum

蜡叶曲霉拉丁属名: Aspergillus herbariorum

异常威克汉姆酵母拉丁属名: Wickerhamomyces anomalus

根瘤菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

青变色链霉菌拉丁属名: Streptomyces  glaucovarians

多色节杆菌拉丁属名: Arthrobacter polychromogenes

季也蒙迈耶氏酵母拉丁属名: Meyerozyma guilliermondii

酿酒酵母拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

*芽胞杆菌拉丁属名: Bacillus infantis

新疆盐地杆菌拉丁属名: Salinibacterium xinjiangense

烟曲霉拉丁属名: Aspergillus fumigatus Fresenius

硬杆菌拉丁属名: Arthrobacter  scleromae

季也蒙假丝酵母拉丁属名: Candida guilliermondii
田鼠痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒说明书ATP敏感性钾通道亚基kir6.2 Anti-ATP-sensitive K+ channel subunit Kir6.2 0.1ml

Escherichka coli K99 英文名称： 猪源产肠毒素性大肠杆菌K99 0.2ml

P选择素 Anti-P-selectin 0.1ml

Anti-Synapsin II /FITC 荧光素标记神经突触素2IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Met(Tyr1349) 磷酸化肝细胞生长因子受体(原癌基因) 规格 0.1ml

HIV-1(gp41) 病毒(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

大鼠Smad7 ELISA试剂盒 英文名称：Rat Mothers against decapentaplegic homolog 7,Smad7 ELISA Kit特价供应

CD27 英文名称： CD27 0.2ml

Anti-DR3/APO3 死亡受体3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

TARC/CCL17(Human thymus activation regulated chemokine) ELISA Kit 人胸腺活化调节趋化因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-GADD34 生长抑制DNA损伤基因34Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgG/APC APC标记的小鼠抗人IgG 规格 0.1ml

human similar to RIKEN cDNA 4931408D14 gene ELISA kit 人类似RIKEN cDNA 4931408D14 基因 96T

SPRN 英文名称： 新朊蛋白 0.2ml

Human retinoic acid inducible gene/RIG-like receptor,RLR-9 ELISA Kit 人视黄酸诱导基因/RIG-1样受体 96T

TRPV2 英文名称： 辣椒素受体样蛋白1 0.1ml

CHMP2A 英文名称： 腺癌标志物CHMP2A 0.1ml

Anti-CXCR1/IL-8RA 细胞表面趋化因子受体1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

小鼠白介素23(IL-23)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Interleukin 23,IL-23 ELISA Kit进口/分装

小鼠白介素27(IL-27)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Interleukin 27,IL-27 ELISA Kit特价供应

小鼠白介素2受体(IL-2R)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse Interleukin-2 receptor,IL-2R ELISA Kit进口/分装

CRTAM 英文名称： CRTAM 0.2ml

Anti-DPP-I 组织蛋白酶CMulti-class antibodies规格： 0.2ml

AQP4(aquaporin Protein-4) 水通道蛋白-4(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

anti-Cathepsin B 组织蛋白酶BMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh PCDHGA5 原钙粘蛋白γA5 规格 0.2ml

NTRK2 Kit Human 人 Trk-B / NTRK2 ELISA配对 ELISA

phospho-Tau protein(Thr522) 英文名称： 磷酸化微管相关蛋白 0.1ml