PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

短小芽胞杆菌用途: 分类 研究

Lonsdalea quercina subsp. quercina注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

地衣芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus  licheniformis

条纹炭角菌拉丁属名: Xylaria grammica

枯草芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus  subtilis

发酵乳杆菌拉丁属名: Lactobacillus  fermentum

圆芝6号注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

施氏假单胞菌拉丁属名: Pseudomonas  stuzeri

香气红冬孢锁掷孢酵母拉丁属名: Rhodosporidiobolus odoratus

大肠埃希氏菌拉丁属名: Escherichia coli

马腺疫链球菌兽疫亚种拉丁属名: equi       subsp.zooepidemicus

杉叶散斑壳注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

弓形虫(GJS-2株)拉丁属名: gondii

根瘤菌用途: 固氮

三叶草根瘤菌用途: 与白三叶草共生固氮
哈维氏弧菌探针法荧光定量PCR试剂盒 人抗中性粒细胞颗粒(ANGA)ELISA试剂盒英文名称：Human anti-neutrophil granules antibody，ANGA ELISA Kit特价促销

人抗滋养膜细胞(ATA)ELISA试剂盒英文名称：Human anti-trophoblast antibody,ATA ELISA Kit进口/原装

Obestatin/Ghrelin/GHRP 抑制素抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Aromatase 芳香化酶Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-ATF2 (Thr53) 磷酸化活化复制因子2 规格 0.1ml

TrK A 浓缩液 0.1ml 进口分装

Urotensin II 英文名称： 尾加压素2 0.1ml

CD226 英文名称： CD226 0.1ml

Anti-MCP-3/CCL7 单核细胞趋化蛋白3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

GSH-Px kit(human) 人谷胱甘肽过氧化物酶elisa试剂盒Multi-class antibodies规格： 96T

Anti-LAMR1 层粘连蛋白受体1单克隆Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Islet 1 基因增强结合蛋白1 规格 0.2ml

Human Lyme IgG ELISA Kit 人莱姆IgG 96T

PTP zeta 英文名称： 磷酸蛋白聚糖PTPRZ 0.2ml

大鼠L-鼠乳酸脱氢酶(L-LDH) ELISA试剂盒 英文名称：Rat L-Lactate Dehydrogenase,L-LDH ELISA Kit特价供应

大鼠L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒英文名称：Rat L-Selectin ELISA Kit 进口/分装

大鼠N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA试剂盒英文名称：Rat N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP ELISA Kit进口/原装

大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒英文名称：Rat N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit 特价供应

大鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA试剂盒英文名称：Rat N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKP ELISA Kit 特价促销

Fibulin 1 衰老关键蛋白抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

癌易感基因1(人) Anti-BRCA1 0.1ml

CRMP3 英文名称： 二氢嘧啶酶相关蛋白3 0.2ml

Anti-GABRA1 G1氨基丁酸A型受体α1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

HA(Human Hyaluronic acid) ELISA Kit 人透明质酸Multi-class antibodies规格： 96T

Anti-IFABP 小肠型脂肪酸结合蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MAP4 微管相关蛋白4 规格 0.1ml

RIPK2(Human receptor TNFRSF-interacting serine-threonine kinase 2) ELISA Kit 人受体TNFRSF结合丝酸苏酸激酶2 96T

SQSTM1 英文名称： 泛素结合蛋白P62 0.1ml