PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

褐黄金钱菌LDH (Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

巴氏醋杆菌罗旺亚种LTF/LF (Lactoferrin) ELISA Kit拉丁属名: Acetobacter  pasteurianus subsp. lovaniensis

内(涂)链霉菌LDL (Low Density Lipoprotein) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces endus

紫红曲霉LEP (Leptin) ELISA Kit 拉丁属名: Monascus purpureus

蜡状芽孢杆菌MIP-1α (Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  cereus

藤黄色土生单胞菌MIP-1β (Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta) ELISA Kit 拉丁属名: Terrimonas  lutea

长根小奥德蘑RETN (Resistin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌MMP-1 (Matrix Metalloproteinase 1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

葡萄座腔菌MMP-2 (Matrix Metalloproteinase 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

福氏志贺氏菌MMP-3 (Matrix Metalloproteinase 3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母MMP-24 (Matrix Metalloproteinase 24) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

荧光假单胞菌生物型FMMP-7 (Matrix Metalloproteinase 7) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  fluorescens biotype F

鲁氏酵母MMP-8 (Matrix Metalloproteinase 8) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  rouxii

诺尔氏菌属MMP-9 (Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit 拉丁属名: Knoellia    locipacati

酿酒酵母ANG (Angiogenin) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae
RT-病毒野生株探针法荧光定量PCR试剂盒 小鼠白介素18(IL-18)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Interleukin 18,IL-18 ELISA Kit进口/原装

小鼠白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Interleukin 1α,IL-1α ELISA Kit 进口/原装

小鼠白介素1β (IL-1β)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Interleukin 1β,IL-1β ELISA Kit进口/原装

小鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse Interleukin 1 receptor antagonist, IL-1ra ELISA Kit特价供应

PKB (human) 人蛋白激酶BMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-CXCR1/IL-8RA 细胞表面趋化因子受体1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh NGX6 细胞相关基因6 规格 0.1ml

CD177 英文名称： 嗜中性粒细胞抗原CD177 0.2ml

Anti-BrdU 溴脱氧尿苷Multi-class antibodies规格： 0.1ml

B7-H4 B7-H4(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-DPP-I 组织蛋白酶CMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PCDHGA4 原钙粘蛋白γA4 规格 0.2ml

TNF Kit Human 人 TNF-alpha / TNFA / TNFSF2 ELISA配对 ELISA

phospho-Tau protein(Thr529) 英文名称： 磷酸化微管相关蛋白 0.1ml

Ubiquitin D 英文名称： 泛素D 0.2ml

DUSP13 英文名称： 双特异性磷酸酶13 0.2ml

Anti-ARF6 ADP核糖基化因子6Multi-class antibodies规格： 0.2ml

phospho-eIF4EBP1+2+3 (Thr45) 英文名称： 磷酸化4E结合蛋白1,2,3 0.1ml

磷酸化蛋白激酶B anti-P-AKT1/PKB1/2/3 0.1ml

Anti-SYK/FITC 荧光素标记非受体型酪氨酸蛋白激酶IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Mre11 (Ser676) 磷酸化DNA损伤关键蛋白Mre11 规格 0.1ml

CRIPTO 英文名称： 衍化生长因子单克隆(C端) 0.1ml

Anti-PCNA 增殖细胞核抗原Multi-class antibodies规格： 0.1ml

VD2(Human Vitamin D2) ELISA Kit 人维生素D2Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-PLK1/STPK13 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Plk1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh HERG/KCNH2/ERG 特异性钾离子通道蛋白 规格 0.1ml

Col IV (Human Collagen Type IV ) ELISA KIT 人Ⅳ型胶原 96T

PQBP1 英文名称： 多谷酰胺结合蛋白1 0.2ml