PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

根霉CT (Calcitonin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

嗜热链球菌ACTH (Adrencocorticotropic Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Streptococcus  thermophilus

土地芽孢杆菌OPG (Osteoprotegerin) ELISA Kit拉丁属名: Terribacillus  jinchangensis

解脂假丝酵母解脂变种PRL (Prolactin) ELISA Kit拉丁属名: Candida  lipolytica var. lipolytica

假单胞菌属MYO (Myoglobin) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  extremaustralis

枯草芽孢杆菌Tn-T (Troponin T) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

植物乳杆菌Tn-I (Troponin I) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  plantarum

运动节杆菌PAPPA (Pregnancy Associated Plasma Protein A) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter agilis

哈茨木霉ALP (Alkaline Phosphatase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母NSE (Neuron Specific Enolase) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

克劳氏芽孢杆菌GLP-1 (Glucagon Like Peptide 1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  clausii

韩国假单胞菌IL-12/p40 (Interleukin 12 p40) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  koreensis

Enterobacter cloacae subsp. dissolvensIL-12 (Interleukin 12) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希菌TGF-β1(Transforming Growth Factor β1) ELISA Kit拉丁属名: coli

球毛壳霉bFGF/FGF2 (Basic Fibroblast Growth Factor) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
解脲脲原体探针法荧光定量PCR试剂盒供应商DNASE1L1 英文名称： DNA酶1样蛋白1 0.2m

CDH2 N-Cadherin / CD325 / CDH2 兔单抗 (PE) Human

ENO1+ENO2+ENO3 英文名称： 神经元，肌肉特异性烯醇化酶 0.2ml

蛋白酪氨酸磷酸酶-1B/磷酸化酪氨酸 Anti-PTP-1B/pTyr 0.1ml

Anti-phospho-Synapsin I (Ser553) /FITC 荧光素标记磷酸化神经突触素1IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-MK6 (Ser207) 磷酸化原活化蛋白激酶MKK6 规格 0.1ml

HSP-70 peptide 热休克蛋白-70(多肽抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

CD163L1 英文名称： CD163蛋白样1 0.1ml

Anti-Fibulin 1 “衰老关键蛋白”Multi-class antibodies规格： 0.2ml

IL-23 小鼠白介素-23Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Eph receptor B2/Ephb2 Ephb2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MTCH2 线粒体载体同源蛋白2 规格 0.2ml

ECP(Human eosinophil cationic protein) ELISA Kit 人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白 96T

SIT 英文名称： 跨膜接头蛋白SIT 0.1ml

大鼠白介素23(IL-23)ELISA试剂盒英文名称：Rat Interleukin 23,IL-23 ELISA Kit 特价供应

大鼠白介素27(IL-27)ELISA试剂盒英文名称：Rat Interleukin 27,IL-27 ELISA Kit特价促销

大鼠白介素2可溶性受体(IL-2sR)ELISA试剂盒英文名称：Rat soluble Interleukin 2 recepter,IL-2sR ELISA Kit进口/分装

大鼠白介素2可溶性受体α链(IL-2sRα/CD25)ELISA试剂盒英文名称：Rat soluble interleukin-2 receptor,IL-2sRα ELISA Kit进口/原装

EphA1 R(Ephrin A1 Receptor) EphA1-R受体抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

钠钾ATP酶通道蛋白 Anti-ATP1b2/Na+K+ ATPase 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-EGFR (Tyr1138) 磷酸化表皮生长因子受体 规格 0.1ml

CRF 英文名称： 促肾上腺皮质激素释放因子 0.1ml

Anti-DKK3 蛋白DKK3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Anti-PMS2/FITC 荧光素标记错配修复基因PMS2IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Goat Anti-Guinea IgG Whole serum 羊抗豚鼠IgG抗血清Multi-class antibodies规格： 1ml

端粒酶 Anti-hTRT Telomerase catalytic subunit 0.1ml

Rabbit anti-Rat IgG whole serum 兔抗大鼠IgG抗血清 1ml

Spastin 英文名称： 纤维母细胞表面蛋白 0.1ml