PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

枯草芽胞杆菌枯草亚种PCT (Procalcitonin) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis subsp. subtilis

栎小皮伞APLN (Apelin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希氏杆菌MMP-11 (Matrix Metalloproteinase 11) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia  coli

枯草芽孢杆菌EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

锅孢霉ApoA1 (Apolipoprotein A1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

栗酒裂殖酵母ApoA2 (Apolipoprotein A2) ELISA Kit拉丁属名: Schizosaccharomyces pombe

耐辐射奇球菌ApoC3 (Apolipoprotein C3) ELISA Kit拉丁属名: Deinococcus radiodurans

白僵菌用途: 害虫生物防治

酿酒酵母BMP-2 (Bone Morphogenetic Protein 2) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

臭曲霉GROα/CXCL1 (Growth Regulated Oncogene Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  foetidus

冠突曲霉EPO (Erythropoietin) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus cristatus

冷杆菌IFN-γ (Interferon Gamma) ELISA Kit拉丁属名: Cryobacterium  arcticum

聚生壳菌IGF-1 (Insulin-Like Growth Factor 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

海洋杆菌IL-1α (Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Pontibacter sp.

膜醭毕赤酵母IL-1β (Interleukin 1 Beta) ELISA Kit拉丁属名: Pichia membranifaciens
差异脲原体探针法荧光定量PCR试剂盒规格人羟脯氨酸(Hyp)ELISA试剂盒英文名称：Human hydroxyproline，Hyp ELISA Kit进口/原装

人羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)ELISA试剂盒英文名称：Human Hydroxyproline-Rich Glycoprotein,HRGP ELISA Kit特价供应

人桥粒芯糖蛋白-1(DGS-E1)ELISA试剂盒 英文名称：Human desmogleins 1,DGS-E1 ELISA Kit特价促销

Pokemon (POK Erythroid Myeloid Ontogenic factor) “蒙”蛋白又称“波克曼”蛋白Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Axin1 轴蛋白1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-AKT1/2/3 (Tyr315/316/312) 磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3 规格 0.1ml

MMP-9 浓缩液 0.1ml 进口分装

CD161 英文名称： CD161 0.1ml

Anti-Phospho-PLC beta3 (Ser1105) 磷酸化磷酯酶Cβ3Multi-class antibodies规格： 0.1ml

HO-2(Human heme oxygenase 2) ELISA Kit 人血红素氧合酶2Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-NuMA 核有丝分裂器NuMA蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh IFNA10/Interferon alpha10/Interferon alpha C 干扰素α10 规格 0.2ml

GP-BB(Mouse Glycogen phosphorylase BB)ELISA Kit 小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB 96T

Prominin 2 英文名称： 造血干细胞抗原CD133相关蛋白 0.1ml

BAF53A 英文名称： 肌动蛋白样蛋白6A 0.2ml

Anti-Runx3 Runx3Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Human sreum albumin,HSA ELISA Kit 人血清白蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-Ret (Tyr1062) 磷酸化指状蛋白RETMulti-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh H Cadherin/CDH13 钙粘蛋白 规格 0.2ml

Gzms-B(Mouse granzymes B) ELISA Kit 小鼠颗粒酶B 96T

OTX2 英文名称： 转录因子OTX2 0.2ml

CREPT 英文名称： 高表达细胞周期相关蛋白 0.2ml

Anti-Integrin alpha 4/CD49d 整合素α4Multi-class antibodies规格： 0.1ml

bullfrog growth hormone,GH ELISA Kit 蛙生长激素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-DEC-205/CD205/Ly75/FITC 荧光素标记CD205IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CYP11A1/P450SCC 细胞色素P450 11A1 规格 0.1ml

Mouse IgM/FITC 荧光素标记小鼠IgM 0.3ml

Phospho-LIMK1(Thr508) + LIMK2(Thr505) 英文名称： 磷酸化单丝酸蛋白激酶1/2 0.1ml