PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

河北木霉IL-2 (Interleukin 2) ELISA Kit 拉丁属名: Trichoderma hebeiense

四绕曲霉IL-4 (Interleukin 4) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus quadricinctus

酿酒酵母IL-6 (Interleukin 6) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

植物乳杆菌IL-24 (Interleukin 24) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  plantarum

损蘑菇紫色杆菌IL-10 (Interleukin 10) ELISA Kit 拉丁属名: Janthinobacterium agaricidamnosum

斜卧青霉IL-17 (Interleukin 17) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium decumbens

灵芝(红芝, 赤芝)IFN-γ (Interferon Gamma) ELISA Kit拉丁属名: Ganoderma lucidum

水原市土地杆菌TNF-α (Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Pedobacter  suwonensis

乳杆菌属VEGF (Vascular Endothelial cell Growth Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Lactobacillus  sp.

嗜中温寒冷杆菌TGF-β1 (Transforming Growth Factor β1) ELISA Kit 拉丁属名: Frigoribacterium sp.

耐辐射奇球菌CRP (C-Reactive Protein) ELISA Kit拉丁属名: Deinococcus radiodurans

小海绵羊肚菌INS (Insulin) ELISA Kit拉丁属名: Morchella spongiola

汉逊德巴利酵母LH (Luteinizing Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Debaryomyces hansenii

大肠埃希氏菌GH (Growth Hormone) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia coli

短波单胞菌属REN (Renin) ELISA Kit拉丁属名: Brevundimonas  staleyi
布氏布氏锥虫探针法荧光定量PCR试剂盒供应商Rhesus antibody Rh phospho-HNF4 (Ser313) 磷酸化肝细胞核因子4α 规格 0.1ml

CCR-1(CC chemokine receptor 1) 细胞表面趋化因子受体1抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人凋亡相关半胱氨酸肽酶4(Casp4)ELISA试剂盒英文名称：human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase,Casp4 ELISA Kit特价供应

人凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒英文名称：Human Factor-related Apoptosis,FAS ELISA Kit 进口/原装

人凋亡相关因子配体(FASL)ELISA试剂盒英文名称：Human Factor-related Apoptosis ligand,FASL ELISA Kit 进口/分装

人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒英文名称：Human apoptosis signal regulating kinase 1,ASK-1 ELISA Kit进口/原装

人凋亡诱导因子(AIF)ELISA试剂盒英文名称：Human apoptosis inducing factor，AIF ELISA Kit进口/原装

CD13 英文名称： CD13肽酶N 0.1ml

Anti-IL-17D/IL-27 白介素-17DMulti-class antibodies规格： 0.2ml

FSA(Human fetal sulfoslycoprotein antigen) ELISA Kit 人胚胎性硫糖蛋白抗原Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-HHV8/ORF K2 类病毒8Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MG 鸡毒支原体 规格 0.2ml

AC-1(Human adenylyl cyclase 1) ELISA Kit 人腺苷酸环化酶1 96T

REG1 beta 英文名称： 胰岛因子β 0.2ml

AT1R(Angiotensin II Type 1 Receptor) 紧张素Ⅱ-1型受体抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)ELISA试剂盒英文名称：Human Pulmonary surfatcant-associated protein C,SP-C ELISA Kit特价供应

人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)ELISA试剂盒 英文名称：Human Pulmonary surfatcant-associated protein D,SP-D ELISA Kit特价促销

人肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA试剂盒 英文名称：Human pulmonary activation regulated chemokine,PARC ELISA Kit进口/分装

人肺耐药蛋白(LRP)ELISA试剂盒英文名称：Human Lung resistance-related protein,LRP ELISA Kit特价供应

人衣原体(Cpn-Ab)ELISA试剂盒 英文名称：Human Chlamydia pneumoniae antibody,Cpn-Ab ELISA Kit特价促销

Integrin alpha 1 整合素α1抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

CRAT 英文名称： 肉毒碱O-乙酰基转移酶 0.2ml

Anti-phospho-Histone H1.4 (Thr18) 磷酸化乙酰化组蛋白H1bMulti-class antibodies规格： 0.1ml

M-CSF(Human Macrophage Colony-Stimulating Factor) ELISA kit 人巨噬细胞集落刺激因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-glypican 3/GPC3 磷脂酰基醇蛋白聚糖-3Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Bov IgG/Gold 胶体金标记的小鼠抗IgG 规格 0.5ml

Agtr I a(Human angiotensin II receptor type I a) ELISA Kit 人紧张素Ⅱ受体Ⅰa型 96T

RBPJK 英文名称： Notch转录调控蛋白RBPJK 0.2ml