PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

紧密毛霉Tn-I (Troponin I) ELISA Kit拉丁属名: Mucor strictus

固氮螺菌属PAPPA (Pregnancy Associated Plasma Protein A) ELISA Kit拉丁属名: Azospirillum  humicireducens

谷氨酸棒状杆菌ALP (Alkaline Phosphatase) ELISA Kit拉丁属名: Corynebacterium glutamicum (Kinoshita et al.) Abe et al

鞘氨盒菌属GLP-1 (Glucagon Like Peptide 1) ELISA Kit拉丁属名: Sphingopyxis  wooponensis

坚硬芽孢杆菌IL-1β (Interleukin 1 Beta) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  firmus

苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种IL-12 (Interleukin 12) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

葡萄座腔菌IL-12 p40 (Interleukin 12 p40) ELISA Kit拉丁属名: Botryosphaeria dothidea

枯草芽孢杆菌FE (Ferritin) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

粉红单端孢霉IgG (Immunoglobulin G) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

柠檬黄色农球菌TF (Serotransferrin) ELISA Kit拉丁属名: Agrococcus citreus

油菜菌核病菌CG (Chorionic Gonadotropin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

溶杆菌GH (Growth Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Lysobacter sp.

Erwinia amylovoraIL-9 (Interleukin 9) ELISA Kit拉丁属名: Erwinia amylovora

运动节杆菌PCIII (Procollagen III) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter agilis

金龟子绿僵菌PIIINP (N-Terminal Procollagen Ⅲ Propeptide) ELISA Kit拉丁属名: Metarhizium anisopliae
皱纹毛圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒供应商TMIGD1 英文名称： 跨膜TMIGD1蛋白 0.1ml

Anti-beta-Amyloid(25-35) β淀粉样肽(25-35)Multi-class antibodies规格： 0.1ml

ET-1 英文名称： 内皮素1 0.1ml

非受体型酪氨酸蛋白激酶 Anti-SYK 0.1ml

Anti-TIMP-1/FITC 荧光素标记金属蛋白酶组织抑制因子-1IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-LSP1 (Ser204) 磷酸化白细胞F肌动蛋白结合蛋白 规格 0.1ml

phospho-BAD(pSer128) 磷酸化相关死亡促进因子Multi-class antibodies规格： 0.5mg

CCR4 英文名称： 细胞表面趋化因子受体4 0.1ml

Anti-IL-15RA 白介素15受体αMulti-class antibodies规格： 0.2ml

HSCCAg-2(uman Squamous Cell Carcinoma Antigen 2) ELISA Kit 人细胞癌抗原2Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-HO-2 血红素氧合酶2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MCP-2/CCL8 单核细胞趋化蛋白2 规格 0.2ml

PDI(Human Protein disulfide-isomerase precursor) ELISA Kit 人蛋白二硫化物异构酶前体 96T

RBMX2 英文名称： RNA结合蛋白X-连锁蛋白2 0.1ml

AD7C-NTP 英文名称： 神经丝蛋白 0.2ml

Anti- Beta-arrestin 2/FITC 荧光素标记β-抑制蛋白2IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

TG ELISA Kit 大鼠甲状腺球蛋白Multi-class antibodies规格： 48T

Anti- Beta-Amyloid(1-40)/FITC 荧光素标记β淀粉样肽(1-40)IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FOXO3A 叉头蛋白O3A 规格 0.2ml

AmAC-1 ELISA Kit 大鼠巨噬细胞替代激活相关化学因子1 96T

NCR2 英文名称： 细胞毒性受体NK-p44 0.2ml

CPLX1 英文名称： Complexin I/复合素1 0.2ml

Anti-phospho-IRS1(Ser612) 磷酸化受体底物-1Multi-class antibodies规格： 0.1ml

cath-D(Human cathepsin D) ELISA Kit 人组织蛋白酶DMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-Nox-4/NADH NADPH氧化酶4Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh IHH HHG2 规格 0.2ml

CRH(Mouse corticotropin releasing hormone) ELISA Kit 小鼠促肾上皮质激素释放激素 96T

phospho-AMPK alpha 2 (Ser173) 英文名称： 磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2 0.1ml