PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

细丽外担菌Canine PLG (Plasminogen) ELISA Kit拉丁属名: Exobasidium gracile

核盘菌Canine CRP (C-Reactive Protein) ELISA Kit用途: 教学科研

PhaeobotryonCanine Microalbumin ELISA Kit拉丁属名: Phaeobotryon rhois

Microbacterium halotoleransCanine MYO (Myoglobin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母Canine ADORA1 (Adenosine A1 Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

黑曲霉Canine NA/NE (Noradrenaline/Norepinephrine) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  niger

巧克力糖霉菌Canine ACCPA (anti-cyclic citrullinated peptide antibody) ELISA Kit拉丁属名: Glycomyces  chocolcotum

黄曲霉Canine βMSH (beta-Melanocyte Stimulating Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus flavus

冠突曲霉Canine Ta1 (Thymosin-α1) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus cristatus

鞘氨单胞菌（加词待译）Canine PS1 (Presenilin 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

无花果曲霉Canine PACAP-38 (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide 38) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  ficuum

枯草芽孢杆菌Canine PACAP-27 (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide 27) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

秀珍菇Canine KIM-1 (Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

短小芽孢杆菌Canine BNP (Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus pumilus

酿酒酵母Canine CKMB (Creatine Kinase MB Isoenzyme) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae
木霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒供应商Anti-CK16 细胞角蛋白16Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh NSDHL 类固醇脱氢酶样蛋白NSDHL 规格 0.2ml

PVDF(Polyvinylidene Fluoride Membrane) PVDF膜/二氟化树脂膜(膜孔径:0.45um) 15X20cm

TRIM41 英文名称： 环指蛋白调节蛋白激酶C蛋白 0.2ml

C9orf135 英文名称： 9号染色体开放阅读框135 0.2ml

Anti-CK16 细胞角蛋白16Multi-class antibodies规格： 0.1ml

小鼠标志物CA125ELISA试剂盒英文名称：Mouse ovarian cancer marker-CA125 ELISA Kit进口/原装

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IL-17 小鼠白介素-17Multi-class antibodies规格： 48T

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Rhesus antibody Rh MTLC 致癌基因 规格 0.2ml

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Phospho-SirT1 (Ser27) 英文名称： 磷酸化沉默调节蛋白1 0.1ml

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CXCL14(CXC-chemokine ligand 16) CXC趋化因子14抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

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Anti-DRADA/ADAR1/FITC 荧光素标记双链RNA腺苷酸脱氨基酶(N端)IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CXCL9/MIG γ干扰素诱导单核细胞因子 规格 0.1ml

Thymopentin 胸腺五肽 0.5mg

Prostate Specific Antigen 英文名称： 激肽释放酶3/舒素3 0.2ml