PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

香魏菇(侧耳)Sheep cTnT/TNNT2 (Troponin T Type 2, Cardiac) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

鸡腿菇(川鸡3号)Sheep CASP 9 (Caspase 9) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

漆柄小孔菌Sheep CR1 (Complement Receptor type 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母Sheep HA (Hemagglutinin) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

金色产色链霉菌Sheep RNASEH (Ribonuclease H )ELISA Kit用途: 产多氧霉素，抗水稻纹枯病

小单孢菌Sheep SOX9 (Sex Determining Region Y Box Protein 9) ELISA Kit 用途: 代谢产物具有活性。

布氏正青霉Sheep TNFSF14 (Tumor Necrosis Factor Ligand Superfamily, Member 14)ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

香菇Sheep CKLFSF6 (Chemokine Like Factor Superfamily 6) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

灵芝Sheep EGR1 (Early Growth Response Protein 1) ELISA Kit 用途: 试验栽培

苏云金芽胞杆菌Sheep ANG I R-Ab (Angiotensin I Receptor Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  thuringiensis

铜生金球菌Sheep PRSS1 (Protease, Serine, 1) ELISA Kit 拉丁属名: Metallosphaera cuprina

枯草芽孢杆菌Sheep MIP-3α (Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  subtilis

紫棕炭团菌Sheep EMA (Epithelial Membrane Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Hypoxylon fuscum

解淀粉芽孢杆菌Sheep Gal (α-Galactoyl) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  amyloliquefaciens

pET-44cSheep MUC13 (Mucin 13) ELISA Kit拉丁属名: 宿主：DH5α，BL21
文氏密螺旋体探针法荧光定量PCR试剂盒供应商大鼠雌激素受体(ER)ELISA试剂盒 英文名称：Rat Estrogen Receptor,ER ELISA Kit特价促销

大鼠雌三醇(E3)ELISA试剂盒英文名称：Rat Estriol,E3 ELISA Kit特价供应

大鼠促黄体激素(LH)ELISA试剂盒英文名称：Rat luteotropic hormone,LH ELISA Kit进口/原装

大鼠促甲状腺素(TSH)ELISA试剂盒 英文名称：Rat Thyroid Stimulating Hormone,TSH ELISA Kit进口/原装

ER- Alpha/ER alpha peptide 雌激素受体α抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

磷酸化相关死亡促进因子 Anti-phospho-BAD 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-EGFR (Thr678) 磷酸化表皮生长因子受体 规格 0.1ml

CCL21 英文名称： 淋巴细胞趋化因子CCL21 0.1ml

Anti-ECP 嗜酸性粒细胞阳离子蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

sCD38(Human Soluble Cluster of differentiation 38) ELISA Kit 人可溶性CD38Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Measles virus fusion protein 病毒融合蛋白Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/Cy5 Cy5标记的小鼠抗人IgM 规格 0.1ml

sEPCR(Human soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit 人可溶性内皮细胞蛋白C受体 96T

SORCS2 英文名称： 液泡蛋白分选受体SORCS2 0.2ml

小鼠巨噬细胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse Macrophage Inflammatory Protein 1δ,MIP-1δ ELISA Kit 特价促销

小鼠巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Macrophage Inflammatory Protein 2,MIP-2 ELISA Kit 特价供应

小鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Macrophage Inflammatory Protein 3α,MIP-3α ELISA Kit 进口/原装

IL-6(Interleukin-6) 白介素6(白细胞介素-6)(多肽抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-Phospho-CD19 (Tyr531) 磷酸化CD19Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Pancreatic Amylase 胰淀粉酶 规格 0.1ml

IL6R Kit Mouse 小鼠 IL6RA / CD126 ELISA配对 ELISA

Cox A16 polymerase3D 英文名称： 柯萨奇病毒A16型聚合酶3D 0.2ml

Anti-ER-Alpha 雌激素受体αMulti-class antibodies规格： 0.1ml

GM-CSF 小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-FAF1 Fas相关1因子Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rat IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的小鼠抗大鼠IgG 规格 0.1ml

VB6(Human Vitamin B6) ELISA Kit 人维生素B6 96T

phospho-Src(Tyr529) 英文名称： 磷酸化Src原癌基因 0.1ml