PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

盐湖洛克氏菌Sheep GARS (Glycyl tRNA Synthetase) ELISA Kit拉丁属名: Loktanella  salsilacus

红平菇Sheep P-GP (Permeability Glycoprotein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枝状枝孢Sheep PGF2α (Prostaglandin F2α) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

细交链孢霉Sheep CD59 (Protectin) ELISA Kit 用途: 植物病原物；用于该类群菌的系统学研究

拜城拟诺卡氏菌Sheep ANP (Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Nocardiopsis baichengensis

蜡样芽胞杆菌Sheep CA9 (Carbonic Anhydrase IX) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus cereus

长双歧杆菌Sheep MT2 (Metallothionein 2) ELISA Kit 拉丁属名: Bifidobacterium  longum

巨大芽孢杆菌Sheep EFNA1 (Ephrin A1) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus megaterium

斑污拟盘多孔孢Sheep ALDOA (Aldolase A, Fructose Bisphosphate) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

猿轮状病毒Sheep MLZE (Melanoma Derived Leucine Zipper Extra Nuclear Factor) ELISA Kit拉丁属名: Simian rotavirus

枯草芽孢杆菌Sheep ADCY3 (Adenylate Cyclase 3) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

斯达亨利拿逊酵母Sheep ASPN (Asporin) ELISA Kit拉丁属名: Nadsonia starkeyi-henricii

果生链核盘菌Sheep BPI (Bactericidal/Permeability Increasing Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

扩展青霉Sheep CKLFSF4 (Chemokine Like Factor Superfamily 4) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium expansum

金黄色葡萄球菌（不提供）Sheep PRB (Retinoblastoma Tumor Suppressor Protein) ELISA Kit拉丁属名: Staphylococcus aureus
齿垢密螺旋体探针法荧光定量PCR试剂盒 DHRS7C 英文名称： 短链脱氢酶/还原酶家族7C 0.2ml

Anti-Artemin ArteminMulti-class antibodies规格： 0.2ml

DUT 英文名称： 脱氧尿苷三磷酸酶DUT 0.1ml

生成素-1 Anti-ANG-1 0.1ml

Anti-Zfp91/FITC 荧光素标记相关新基因IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Ezrin (Thr567) 磷酸化埃兹蛋白 规格 0.1ml

Cyclin D3(C-term) 周期素D3抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

CCK8 英文名称： 胆囊收缩素8 0.1ml

Anti-IL-13Ra2 白细胞介素-13受体a2Multi-class antibodies规格： 0.2ml

anti-Q-Ab(Human anti-Q fever antibody) ELISA Kit 人抗Q热Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-IL-17 白介素-17(人)Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh LYL1 淋巴细胞性相关序列1 规格 0.2ml

LDLR(Human very low density lipoprotein receptor) ELISA Kit 人受体 96T

RAB2 英文名称： ras癌基因家族Rab2 0.2ml

人金葡菌肠毒素(SE)ELISA试剂盒 英文名称：Human staphylococcus aureus enterotoxins,SE ELISA Kit特价促销

人金属硫蛋白(MT)ELISA试剂盒英文名称：Human Metallothionein，MT ELISA Kit特价促销

phospho JAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008) 磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-AE3/SLC4A3 阴离子交换蛋白3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-Caveolin-2(Tyr19) 磷酸化细胞质膜微囊蛋白-2 规格 0.1ml

DAB染色试剂盒-每套3支试剂 200片/20ml 黄色,用于IHC和WB

VAPA 英文名称： 囊泡相关膜蛋白相关蛋白A 0.2ml

COPS8 英文名称： 信号转导蛋白亚基8 0.1ml

Anti-IL-12RB1/CD212 白细胞介素-12受体β1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

tTG-IgA(Human Anti-tissue transglutaminase IgA) ELISA kit 人抗组织转谷氨酰胺酶IgAMulti-class antibodies规格： 48T

Anti-IFN-Alpha 2b 干扰素α2bMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MAP3K2/MKK2 原活化蛋白激酶激酶2 规格 0.1ml

LDH(Human Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit 人乳酸脱氢酶 96T

RAD21 英文名称： 核基质蛋白21 0.2ml