PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

恶臭假单胞菌Sheep PLP (Parathyroid Hormone-Like Protein) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  putida

球孢白僵菌Sheep C3 (Complement Component 3) ELISA Kit拉丁属名: Beauveria bassiana

多栏纯洁杆菌Sheep GAD (Glutamic Acid Decarboxylase) ELISA Kit拉丁属名: Modestobacter  sp.

广食黄杆菌Sheep PDGFD (Platelet Derived Growth Factor D) ELISA Kit 拉丁属名: Flavobacterium omnivorum

人参布哈加瓦氏菌Sheep TSGF (Tumor Specific Growth Facter/Tumor Supplied Group of Factor) ELISA Kit拉丁属名: Bhargavaea ginsengi

成团泛菌Sheep IGFBP-6 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 6) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

球毛壳Sheep SMM (Smooth Muscle Myosin) ELISA Kit拉丁属名: Chaetomium globosum

酿酒酵母Sheep LEP (Leptin) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

豇豆慢生根瘤菌Sheep SUMO2 (Small Ubiquitin Related Modifier 2) ELISA Kit用途: 与花生共生固氮

鸡伤寒沙门氏菌Sheep L-LDH (L-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit拉丁属名: gallinarum

细极链格孢Sheep FBG (Fibrinogen) ELISA Kit拉丁属名: Alternaria tenuissima

豇豆慢生根瘤菌Sheep C1q (Complement 1q) ELISA Kit用途: 与绿叶、银叶山蚂蝗共生固氮

双歧双歧杆菌Sheep IL-1R2 (Interleukin 1 Receptor Type II) ELISA Kit拉丁属名: Bifidobacterium bifidum

产紫青霉Sheep F-Box Protein 2(FBXO2) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium purpurogenum

保亭油脂酵母Sheep NXF1 (Nuclear RNA Export Factor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Lipomyces baotingensis
瑟氏泰勒虫探针法荧光定量PCR试剂盒说明书APOE 英文名称： 载脂蛋白E 0.1ml

Anti-AVPR2/FITC 荧光素标记精氨酸加压素受体2IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

IgG ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白GMulti-class antibodies规格： 48T

Anti- Alpha-ACTN4/FITC 荧光素标记抗α-辅肌动蛋白4IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FGF22 成纤维细胞生长因子22 规格 0.2ml

P-Selectin(Human P-Selectin/CD62P/GMP140) ELISA kit 人P选择素 96T

Met (c Met) 英文名称： 肝细胞生长因子受体 0.1ml

CCDC90B 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白90B 0.2ml

Anti-mu Opioid receptor μ-型受体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

DF-Ab(Human dengue fever antibody) ELISA Kit 人Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-KLH 血蓝蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh LAP3 亮氨酸氨基肽酶3 规格 0.2ml

NKB ELISA Kit(Ret) 大鼠神经肽B 96T

P2RX6 英文名称： 三磷酸腺苷受体P2X6 0.2ml

PLAP 浓缩液 0.1ml 进口分装

UBE2U 英文名称： 泛素蛋白连接酶U 0.2ml

DYDC1 英文名称： DYDC1蛋白 0.2ml

Anti-ATF4/CREB-2 活化转录因子4Multi-class antibodies规格： 0.1ml

EphB1+EphB2+EphB3+EphB4 英文名称： 酪酸蛋白激酶受体B1+B2+B3+B4 0.2ml

酪氨酸激酶B Anti-Trk B 0.1ml

Anti-Transthyretin /FITC 荧光素标记转甲状腺素蛋白IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Contactin 4 + 6 英文名称： 轴突相关粘附分子 0.2ml

Anti-Phospho-Stathmin (Ser38) 磷酸化原癌基因蛋白18Multi-class antibodies规格： 0.1ml

sP-selectin(Human soluble P-selectin) ELISA Kit 人可溶性P选择素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Plexin A2 神经丛蛋白A2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Hexokinase 2/HK2 己糖激酶2 规格 0.2ml

IFN- Alpha(Mouse Interferon Alpha) ELISA Kit 小鼠α干扰素 96T

PPP1R10 英文名称： 丝酸/苏酸蛋白磷酸酶1调节亚基10 0.2ml