PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

巴氏醋杆菌Sheep SST (Somatostatin) ELISA Kit 拉丁属名: Acetobacter  pasteurianus

大肠埃希菌Sheep IL-2Rβ (Interleukin 2 Receptor Beta) ELISA Kit拉丁属名: coli

异常威克汉姆酵母Sheep PTPRK (Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type K) ELISA Kit  拉丁属名: Wickerhamomyces anomalus

金针菇Sheep CCKBR (Cholecystokinin B Receptor) ELISA Kit用途: 栽培

大豆慢生根瘤菌Sheep CKB (Creatine Kinase, Brain) ELISA Kit用途: 耐受pH4.3

Bacillus aryabhattai Sheep iPLA2 (Phospholipidase A2, Calcium Independent) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

细丽拟盘多毛孢Sheep dDAVP (1-Desamino-8D-Arginine Vasopressin) ELISA Kit拉丁属名: Pestalotiopsis gracilis

苹果链格孢菌Sheep MEPE (Matrix Extracellular Phosphoglycoprotein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

谷氨酸棒杆菌Sheep CK-17/KRT17 (Cytokeratin 17) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

蜡叶散囊菌Sheep CD97 (Cluster of Differentiation 97) ELISA Kit 拉丁属名: Eurotium herbariorum

木糖氧化无色杆菌Sheep RAPGEF1 (Rap Guanine Nucleotide Exchange Factor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Achromobacter xylosoxidans

红色链孢囊菌Sheep αZGP1 (Alpha-2-Glycoprotein 1, Zine Binding) ELISA Kit用途: 代谢产物具有活性。

小柄凸脐蠕孢Sheep TIMP-3 (Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 3) ELISA Kit拉丁属名: Exserohilum pedicellatum

氯酚节杆菌Sheep PUMA (P53 Upregulated Modulator of Apoptosis) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter chlorophenolicus

总状毛霉Sheep CYP24A1 (Cytochrome P450 24A1) ELISA Kit 拉丁属名: Mucor racemosus
黄杆菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒 人生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA试剂盒 英文名称：Human growth hormone releasing peptide-Ghrelin，GHRP-Ghrelin ELISA Kit 进口/原装

人生长激素释放因子(GH-RF)ELISA试剂盒 英文名称：Human growth hormone relasing factor，GH-RF ELISA Kit进口/分装

人生长调节致癌基因α/黑素瘤生激因子(GROα/CXCL1/MGSA)ELISA试剂盒 英文名称：Human growth-regulated oncogeneα/melanoma growth stimulating activity,GROα/MGSA ELISA Kit进口/原装

ompF(putative outer membrane porin F protein) 小肠耶尔森氏菌膜通道蛋白抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

Anti-ARIP2a 激活素受体2AMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-ASK1(Ser967) 磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1 规格 0.2ml

uPA 浓缩液 0.1ml 进口分装

CCDC72 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白72 0.1ml

Anti-MuRF1/Trim63 肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶1Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Tgtp(Human T-cell specific GTPase) ELISA Kit 人T细胞特异性鸟苷三磷酸酶Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-mucin4/Muc4(human) 粘蛋白-4Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh INCA1 INCA1蛋白 规格 0.2ml

sCD40L ELISA Kit 大鼠可溶性CD40配体 96T

presenilin 1 英文名称： 早老素蛋白-1 0.1ml

ARMC3 (Cancer/testis antigen 81) 英文名称： /抗原81 0.2ml

Anti-BRAF/FITC 荧光素标记黑素瘤相关蛋白IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

P III NT ELISA Kit 大鼠Ⅲ型前胶原氨基端肽Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Adiponectin/FITC 荧光素标记脂联素IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FES 原癌基因酪氨酸蛋白激酶FES 规格 0.2ml

SCFR(Human Stem Cell Factor Receptor) ELISA kit 人干细胞因子受体 96T

MMRN1 英文名称： 内皮细胞MMRN1蛋白 0.2ml

Connexin 29 英文名称： 间隙连接蛋白29 0.1ml

Anti-Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr389) 磷酸化核糖体S6蛋白激酶β2Multi-class antibodies规格： 0.1ml

TAb(Human Parathyroid Hormone Related Protein) ELISA Kit 人甲状腺素Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-LIR-6 白球蛋白样受体6Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh KLK11 激肽释放酶11 规格 0.1ml

rT3(Human ReverseTri-iodothyronine) ELISA Kit 人反三甲状腺原酸 96T

Patched 英文名称： Patched/PTCH 0.1ml