PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

弗雷曲霉Sheep PIINP (Procollagen II N-Terminal ProPeptide) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus fresenii

果生链核盘菌Sheep LEPR (Leptin Receptor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

葡萄座腔菌Sheep PLA1 (Phospholipase A1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母Sheep CX43 (Connexin 43) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

哈茨木霉Sheep c-fos ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

产酸克雷伯氏菌Sheep UBAP2 (Ubiquitin Associated Protein 2) ELISA Kit拉丁属名: Klebsiella  oxytoca

玉米黑粉菌Sheep PEX2 (Peroxisomal Biogenesis Factor 2) ELISA Kit 拉丁属名: Ustilago maydis

突孢毛壳Sheep GP6 (Glycoprotein VI, Platelet) ELISA Kit拉丁属名: Chaetomium murorum

多粘类芽胞杆菌Sheep CTNNβ1 (Catenin, Beta 1) ELISA Kit 用途: 分类 研究

酿酒酵母Sheep CSF3/GCSF (Granulocyte Colony Stimulating Factor 3) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

枯草芽孢杆菌Sheep SIGLEC8 (Sialic Acid Binding Ig Like Lectin 8) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

阪崎肠杆菌Sheep IL-3 (Interleukin 3) ELISA Kit 拉丁属名: Enterobacter  sakazakii

*芽胞杆菌（Bacillus atrophaeus）ATCC 9372；（曾用名：枯草芽胞杆菌黑色变种）Sheep FADS2 (Fatty Acid Desaturase 2) ELISA Kit规格: 10 ml/瓶

核盘菌Sheep MSR1 (Macrophage Scavenger Receptor 1) ELISA Kit拉丁属名: Sclerotinia sclerotiorum

琉球曲霉Sheep IFN-α (Interferon Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus luchuensis
环纹背带线虫探针法荧光定量PCR试剂盒说明书大鼠前体蛋白(TpP)ELISA试剂盒英文名称：Rat thrombus precursor protein,TpP ELISA Kit特价促销

大鼠素B2(TXB2)ELISA试剂盒英文名称：Rat Thromboxane B2,TXB2 ELISA Kit特价供应

大鼠调节蛋白(TM)ELISA试剂盒英文名称：Rat thrombomodulin,TM ELISA Kit特价供应

大鼠血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒英文名称：Rat Fibrinogen,Fbg ELISA Kit进口/原装

URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation)C terminal 肝炎病毒X蛋白(HBxAg)C端抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

anti-14-3-3 14-3-3蛋白Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-c-Raf (Ser289) 磷酸化原癌基因c-Raf 规格 0.1ml

CCDC70 英文名称： 卷曲螺旋结构域蛋白70 0.2ml

Anti-Phospho-FoxO3a (Ser318/321) 磷酸化叉头蛋白3AMulti-class antibodies规格： 0.1ml

VEGF-R1 小鼠内皮生长因子受体1Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-F1 operon positive regulatory protein(NT) 肺耶尔森氏菌F1荚膜蛋白(N端)Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MRP1/ABCC1 多药耐药相关蛋白1 规格 0.1ml

HPRI(Human placental ribonuclease inhibitor) ELISA Kit 人胎盘核糖核酸抑止剂 96T

S100A6 英文名称： S100钙结合蛋白A6 0.1ml

CaIPLA2 英文名称： 胞浆钙独立磷脂酶A2 0.1ml

Anti-CD328/Siglec-7 唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素7Multi-class antibodies规格： 0.2ml

小鼠抗增殖细胞核抗原(PCNA)ELISA试剂盒英文名称：Mouse proliferating cell nuclear antigen antibody,PCNA ELISA Kit进口/原装

小鼠抗中性粒/中心体(ACA)ELISA试剂盒 英文名称：Mouse anti-centrol and centrosome antibody,ACA ELISA Kit 特价促销

小鼠抗中性粒细胞核周(pANCA)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibody,pANCA ELISA Kit进口/分装

小鼠抗子宫内膜(EMAb)ELISA试剂盒英文名称：Mouse Endometrium Antibody,EMAb ELISA Kit进口/分装

小鼠颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒英文名称：Mouse granzymes A,Gzms-A ELISA Kit进口/分装

Complement fragment 3c 英文名称： 补体片段C3c 0.2ml

Anti-FLT-3/CD135 FMS样酪氨酸激酶3Multi-class antibodies规格： 0.2ml

mouse Caspase-7 小鼠Caspase-7Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Phospho-FLT3 (Tyr591) 磷酸化FMS样酪氨酸激酶3Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy3 PE-Cy3标记的小鼠抗兔IgG 规格 0.1ml

Irna(Human Immune RNA) ELISA Kit 人免疫核糖核酸 96T

Phospho-Smad1 (Ser465) 英文名称： 磷酸化细胞信号转导分子Smad-1 0.1ml