PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

浅被黑蛋巢Sheep SNRPD1 (Small Nuclear Ribonucleoprotein Polypeptide D1) ELISA Kit 拉丁属名: Cyathus griseocarpus

唾液链球菌Sheep ST2 (Syntenin 2) ELISA Kit 拉丁属名: Streptococcus salivarius

嘴突凸脐蠕孢Sheep SPC (Pulmonary Surfactant Associated Protein C) ELISA Kit 用途: 研究

中国拟迷孔菌Sheep GDF1 (Growth Differentiation Factor 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

总状共头霉Sheep PLCγ1 (Phospholipase C Gamma 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

副氧化微杆菌Sheep CAPF (Cuticular Active Peptide Factor) ELISA Kit拉丁属名: Microbacterium paraoxydans

三叶草根瘤菌Sheep TSC22 (Transforming Growth Factor Beta Stimulated Protein Clone 22) ELISA Kit 用途: 与白三叶草共生固氮

双孢蘑菇Sheep CLDN4 (Claudin 4) ELISA Kit 拉丁属名: Agaricus bisporus

华根霉Sheep FGβ (Fibrinogen Beta) ELISA Kit 拉丁属名: Rhizopus chinensis Saito

海岸微小杆菌Sheep MRP (Multidrug Resistance-Associated Protein) ELISA Kit拉丁属名: Exiguobacterium aestuarii

灵芝草Sheep TI-Ag (Thymus Independent Antigen) ELISA Kit用途: 药用菌

菱形伊萨酵母Sheep RAG-1 (Recombination Activating Gene 1) ELISA Kit拉丁属名: Issatchenkia scutulata

大肠埃希氏杆菌Sheep ANG III (Angiotensin III) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia  coli

豇豆慢生根瘤菌Sheep GSTθ1/GSTt1 (Glutathione S Transferase Theta 1) ELISA Kit 用途: 与花生共生固氮

布鲁氏菌Sheep EAR12 (Eosinophil Associated Ribonuclease A family Member 12) ELISA Kit拉丁属名: abortus
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DCAKD 英文名称： 脱磷酸辅酶A结构域蛋白 0.2ml

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人胃泌素释放多肽(GRP)ELISA试剂盒 英文名称：Human gastrin-reliasing peptide,GRP ELISA Kit特价供应

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人胃泌素细胞(GCA)ELISA试剂盒 英文名称：Human gastrin cell antibody,GCA ELISA Kit特价供应

人胃抑素(GIP)ELISA试剂盒 英文名称：Human gastric inhibitory polypeptide，GIP ELISA Kit进口/原装

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Rhesus antibody Rh L-Selectin/CD62L L选择素 规格 0.1ml

GLP-1(human) 人胰素样肽1 96T

phospho-RAD51(Thr309) 英文名称： 磷酸化Rad51 0.1ml